银屑病相关生物标志物的脂组学发现及验证方法学研究

Psoriasis is a hard cured skin disease, but the traditional chinese medicine shows unique advantage in treatment compared with western medicine, and the type and syndrome of disease is relatively specification, the disease may be used as a good entry point of the development of modern technology methodology research in TCM. The TCM diagnosis of psoriasis usually were divided in three main syndromes "blood hot", "blood stasis" and "blood dry ", but the inner dialectic of the scientific basis is not clear, lacking the objective quantitative data support. Psoriasis studies show that Psoriasis and its complications are closely associated with lipid metabolism. The lipid biomarkers discovery are beneficial to diagnosis and therapeutic evaluation of psoriasis and its complications. This project will be carried in clinical, the clinical indicators will be observed, to explore the lipidomics methodology research in biomarkers discovery relate to TCM syndrome. The HILIC/RPLC/NPLC combine with Q-TOF/QQQ will be used to establish the new rapid, stable, high-throughput qualitative and quantitative methods, the profile of psoriasis serum will be acquired, and the potential biomarkers will be achieved by using multivariate statistical analysis, the lipid metabolites network about "disease - syndrome - prescription" will be established, and then the potential biomarkers will be validated for clinical application, hopeful will support some objective scientific evidence for the pathogenesis of psoriasis, clinical diagnosis and evaluation in TCM.

银屑病是中医药治疗的优势病种，病名、证型相对规范，可作为现代技术在中医药领域方法学研究开展的良好切入点。银屑病中医主要分为血热、血瘀、血燥三个证型，但其辩证论治的内在的科学规律尚不明确，缺乏客观化数据支持。相关研究表明，银屑病及其并发症与脂代谢异常密切相关，脂质生物标志物的发现，有助于银屑病及其合并症的临床诊断及疗效评价。本项目拟从临床实际出发，采用病证结合、方证对应的临床观察方法，探索脂组学在发现银屑病及中医证型相关生物标志物的研究方法。采用亲水色谱（HILIC）、反相色谱（RPLC）、正向色谱（NPLC）联用质谱（Q-TOF、QQQ）技术，建立多平台体系的快速、稳定、高通量的脂质分离、定量检测新方法，获取银屑病人血清脂质轮廓谱，结合临床观察指标，运用多元统计分析发现银屑病及中医证型的潜在生物标志物，构建“病-证-方”的脂代谢物质网络，并回归临床进行验证，为银屑病临床诊断及银屑灵方疗效评价提供客观化依据。

本研究依托临床试验，基于临床血清及晨尿样本开展银屑病中医证型及辨证论治相关的代谢组学及脂组学研究，发现及鉴定与疾病发生发展及中药治疗相关的内源性小分子潜在生物标志物及脂类生物标志物，并通过不同样本群进行验证。为银屑病中医证型的客观化阐释提供依据，为临床诊断和治疗提供参考。.基于UPLC/Q-TOF MS建立了银屑病不同证型代谢组学指纹轮廓谱，开展了银屑病横断面不同证型血清代谢组学研究，对银屑病人横断面血清样本124例（血瘀证50例、血燥证44例、血热证30例），健康对照45例，开展代谢组学研究。应用多元统计分析，比较了分析不同证型银屑病患者的代谢差异，挖掘与银屑病中医辩证分型相关的潜在生物标志物群。检测并鉴定了七大类54个磷脂，对发现的血清中磷脂类化合物进行了筛选鉴定及量化，对比不同证型的组间差异。对169例临床血清中的54个磷脂的峰响应进行模式识别，筛选了六类15个磷脂作为银屑病辨证分析的磷脂类潜在生物标志物。.发展了基于UPLC/Q-TOF MS的脂组学研究技术，考察了血清中脂类提取前处理方法，建立了银屑病不同证型脂组学指纹轮廓谱，对临床新收集的银屑病人血清样本114例（包括血瘀证59例、血燥证28例、血热证27例），及健康对照70例脂组学研究及脂类潜在生物标志物的验证。采用脂组学分析方法采集脂代谢轮廓谱，采用lipidview软件鉴定了多个脂类化合物，进行了多元统计分析，中医证型聚类结果良好。筛选VIP大于1.5的24个脂质化合物作为潜在生物标志物。.依托临床试验，筛选血瘀证病人进行治疗观察，纳入35例病人完成中药治疗观察，其中18例采用银屑灵片进行治疗，17例采用银屑灵优化方颗粒剂进行治疗，三个月治疗期。以银屑病患者血清及晨尿样本为研究对象，开展代谢组学研究，筛查了与疾病和药物治疗相关的代谢通路及潜在生物标志物，结果提示银屑病与脂类、维生素、氨基酸以及辅酶等相关；血清治疗前后的代谢途径主要以脂类代谢为主，考虑与银屑病可能导致的脂类代谢紊乱相关，其中多为甘油三酯与磷脂的代谢。