BAFF/BAFF-R通路介导的Breg活化对肾移植免疫耐受的作用及机制研究

Regulatory B cells (Breg) are a group of B cell subsets with specific immuno-regulatory function, and their role in transplantation is not clear. B lymphocyte stimulating factor (BAFF) plays a key role in the survival of B cells.BAFF-R is its specific receptor. We have found that tBAFF is closely related to acute rejection of renal transplantation. It is reported that BAFF can directly activate Breg in vitro and inhibit the inflammatory response of autoimmune diseases，and Breg play a negative regulatory role mainly through the production of IL-10, TGF-β and natural antibodies. We hypothesized that the BAFF/BAFF-R pathway could induce immune tolerance by mediating Breg activation. In order to verify this hypothesis, we establishing a mixed lymphocyte culture system in vitro to study the mechanism of BAFF/BAFF-R pathway in Breg activation and functioning. We also established BAFF-/-, BAFF-R-/- gene knockout mouse kidney transplantation model to study the molecular mechanism of Breg induced immune tolerance in transplantation, and providing a new strategy for induction of immune tolerance.

调节性B细胞（Breg）为一群具有特异性免疫调节功能的B细胞亚群，在移植免疫中的作用尚不明确。B淋巴细胞刺激因子（BAFF）是B细胞存活的关键因子，BAFF-R是其特异性受体。本课题组前期研究发现，BAFF与肾移植急性排斥反应密切相关。文献报道，BAFF可体外直接激活Breg，通过产生IL-10、TGF-β以及自然抗体等发挥负向调节作用，阻断BAFF/BAFF-R通路可抑制自身免疫性疾病炎症反应。我们假设，BAFF/ BAFF-R通路可通过介导Breg活化诱导移植免疫耐受。为验证这一假设，特设计本研究，拟通过建立体外供受者混合淋巴细胞培养体系，探讨BAFF/BAFF-R通路影响Breg活化及功能的作用机制，并构建BAFF-/-,BAFF-R-/-基因敲除小鼠肾移植模型，研究Breg诱导移植免疫耐受的分子机制，为诱导移植免疫耐受提供新的策略。

调节性B细胞（Breg）为一群具有特异性免疫调节功能的B细胞亚群，在移植免疫中的作用机制尚不明确。B淋巴细胞刺激因子（BAFF）是B细胞存活的关键因子，BAFF-R是其特异性受体。本课题组研究发现，肾移植急性排斥反应患者血清及移植肾组织中的BAFF水平明显升高。我们利用CRISPR/Cas9系统构建BAFF基因敲除小鼠模型，建立供受者混合淋巴细胞培养体系，通过检测B、T淋巴细胞增殖、活性以及功能，研究BAFF/BAFF-R通路在移植排斥反应中的作用。我们改进了小鼠肾移植模型的术式，构建BAFF-/-基因敲除小鼠肾移植模型，通过比较免疫细胞功能及相关细胞因子水平差异，研究BAFF/BAFF-R通路在活化Breg诱导移植免疫耐受的分子机制。结果显示，与野生型小鼠相比较，BAFF-/-小鼠T淋巴细胞细胞增殖无明显差异，但是降低了B淋巴细胞的增殖。BAFF-/-小鼠混合淋巴细胞培养组IL-2、IL-4、IFN-γ与野生小鼠混合培养组比较无明显不同，但是IL-10、IgE水平高于野生组，IgM、IgG水平低于野生组。这提示，阻断BAFF-BAFF-R通路后，可能通过促进产生IL-10的Breg活化，介导免疫抑制反应。体内实验显示，与野生组比较，BAFF-/-肾移植小鼠组，成熟B细胞数量无明显差异，但是前B细胞以及未成熟B细胞数量减少。这提示，阻断BAFF-BAFF-R通路可抑制前B细胞和未成熟B细胞活化，从而抑制移植免疫应答，诱导移植免疫耐受。本课题的完成，对于进一步深入认识B细胞在移植免疫调控中的机制具有重要意义，可为移植免疫耐受诱导和新型免疫抑制剂的研发提供新的思路。