酸性鞘磷脂酶对糖尿病血管病变的影响及α-山竹黄酮的干预作用

内皮细胞功能紊乱是糖尿病血管病变发生发展的关键。神经酰胺是细胞内第二信使，广泛参与了细胞信号通路的调节，已发现神经酰胺可在多个水平上阻断胰岛素信号转导的IRS-1/PI3K/PKB，血管内皮细胞是胰岛素靶组织，我们已发现神经酰胺增加影响高糖状态下的血管内皮功能和胰岛素介导的IRS-1/PI3K/PKB/eNOS,最终导致eNOS的活化及NO的变化。鞘磷脂酶水解鞘磷脂是神经酰胺来源的主要途径之一，山竹黄酮能抑制酸性鞘磷脂酶活性，有报道酸性鞘磷脂酶缺乏鼠胰岛素敏感性较野生型好，我们已观察到高糖培养的内皮细胞酸性鞘磷脂酶活性增加，但2型糖尿病患者血清酸性鞘磷脂酶活性是否改变？酸性鞘磷脂酶活性是否影响内皮细胞功能？抑制酸性鞘磷脂酶活性是否能改善糖尿病血管内皮功能和结构目前均未见报道，因此本课题将对上述问题从临床到细胞研究、动物实验进行探讨，其目的是为糖尿病血管病变的发生机制提供新的思路和治疗新靶点

我们的前期研究发现高血糖可使神经酰胺浓度增加，神经酰胺增加可影响血管内皮功能，酸性鞘磷脂酶可使神经酰胺产生增加，α－山竹黄酮可抑制酸性鞘磷脂酶，因此本课题提出：高血糖状态下酸性鞘磷脂酶活性是否增加？α－山竹黄酮是否能抑制高糖状态下酸性鞘磷脂酶活性而抑制神经酰胺的产生？抑制酸性鞘磷脂酶活性能否改善血管内皮功能？通过用2型糖尿病动物模型db/db小鼠研究发现：糖尿病小鼠血糖水平明显高于正常对照组，有明显胰岛素抵抗情况。糖尿病小鼠神经酰胺和酸性鞘磷脂酶水平升高。山竹黄酮组和地昔帕明组神经酰胺和酸性鞘磷脂酶水平较糖尿病对照组降低。血糖水平及胰岛素抵抗较糖尿病对照组明显改善。与正常对照组比较，糖尿病小鼠血管舒张功能受损，糖尿病小鼠血管内膜层次不清晰，内皮细胞排列不整齐，形态欠规则，内皮细胞损伤，中膜增厚，糖尿病小鼠电镜下超微结构可见内皮细胞水肿，坏死，脱落，结构紊乱，糖尿病小鼠IRS-1/PI3K/PKB/eNOS通路活性下降，山竹黄酮组和地昔帕明组血管舒张功能，内皮细胞超微结构，IRS-1/PI3K/PKB/eNOS通路活性较糖尿病对照组改善。用HUVECs观察发现：随着葡萄糖浓度增高，神经酰胺浓度相应增高，30mM葡萄糖为最高峰，酸性鞘磷脂酶也随葡萄糖浓度增加而增加，用山竹黄酮和地昔帕明干预可降低高糖致神经酰胺和酸性鞘磷脂酶的增高。在高糖状态下，HUVECs细胞凋亡增加，用山竹黄酮和地昔帕明干预可减少HUVECs细胞凋亡。