人巨细胞病毒编码的microRNA在其逃逸NK细胞杀伤中的作用及其机制研究

We report for the first time a circulating miRNA profile for hypertensive patients and demonstrate a novel link between HCMV infection and essential hypertension. These findings may reveal important insights into the.pathogenesis of essential hypertension.In this study, we will investigate that IRF-1 is a direct target of hcmv-miR-UL112, along with the previously reported MICB. Both IRF-1 and MICB may play critical roles in immunologic, inflammatory, and anti-infection responses.Therefore, it is readily plausible that IRF-1 and MICB.repression by hcmv-miR-UL112 could be a unifying mechanism evasive of the host response, especially natural killer cells.

人巨细胞病毒(HCMV)与人类疾病的关系越来越受到关注。申请人最近国际上首次报到HCMV与高血压病发病相关，在高血压患者高表达（Circulation, 2011; 124: 175-184；影响因子14.5）。我们前期研究已证实HCMV编码的microRNA hcmv-miR-UL112可下调自然杀伤细胞（NK）杀伤活性，本课题将以外周血单个核细胞为模型，利用表达hcmv-miR-UL112慢病毒载体及突变hcmv-miR-UL112 HCMV AD169病毒株，研究hcmv-miR-UL112在HCMV逃逸NK细胞杀伤中的作用，深入探讨其分子机制(是否通过下游靶基因MICB 和IRF-1)和信号转导途径（IL-15、IFN-α/β），为揭示HCMV免疫逃逸的机制提供新的证据，同时也为逆转免疫逃逸，增强免疫清除，根治HCMV感染性疾病的新型治疗方案奠定基础。

人类巨细胞病毒（human cytomegalovirus, HCMV）属疱疹病毒科巨细胞病毒属，是人类疱疹病毒组中最大的一种病毒，可引起人类巨细胞病毒感染。最新的研究发现，人血清中也存在HCMV编码的miRNA表达，这可能对于HCMV感染疾病的诊断、治疗、病情监控及发病机制研究具有重要意义。鉴于此，我们课题组对血清中HCMV编码的miRNA hcmv-miR-UL112介导的病毒免疫逃逸机制开展了相关研究。课题组按计划，从健康人外周血分离出外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell, PBMC）做为研究体系，成功建立了hcmv-miR-UL112表达及hcmv-miR-UL112 突变的HCMV病毒感染PBMC体系，并通过TaqMan real-time PCR检测hcmv-miR-UL112在PBMC细胞中的表达水平，结果显示，hcmv-miR-UL112表达水平在经hcmv-miR-UL112的前体 pre-hcmv-miR-UL112慢病毒转染后出现显著增加，提示转染有效。为了研究hcmv-miR-UL112是否会影响NK细胞的功能，我们用lenti-hcmv-miR-UL112或lenti-miR-control转染PBMC细胞后，通过测定 CD107a表达情况来评价NK细胞杀伤活力。结果显示，经lenti-hcmv-miR-UL112处理后的NK细胞杀伤活性被显著阻断。由于IFN在以往研究中被证实是hcmv-miR-UL112的作用靶点，因此课题组分别检测了lenti-hcmv-miR-UL112转染、lenti-hcmv-miR-control转染以及未转染control的PBMC上清液中的IFN-α和IFN-β蛋白水平，发现上述两种蛋白水平显著减低，这提示hcmv-miR-UL112可限制PBMC细胞的IFN生成。此外，当我们在lenti-hcmv-miR-UL112转染前加入抗IFNR Ab后观察到CD107a表达减低，而当向体系中加入重组型IFN之后，CD107a表达水平升高，NK细胞的杀伤活性恢复。故最终得出结论，hcmv-miR-UL112可通过抑制IFN分泌来减低NK细胞杀伤活性。课题组发表标注国家自然基金资助SCI论文2篇，培养博士生2名，硕士生2名。