共抑制分子PD-Ls介导脓毒症树突状细胞分化成熟障碍的研究

脓毒症可导致免疫抑制，树突状细胞（DC）成熟障碍是其重要的因素之一。我们前期研究证实PD-1/PD-Ls负性调控通路通过影响T细胞和单核细胞功能参与了脓毒症的免疫调节。预实验又发现脓毒症小鼠DC高表达PD-L1和PD-L2，我们推测PD-Ls参与了脓毒症DC成熟障碍。本研究拟测定脓毒症患者外周血DC上PD-Ls表达及其与DC成熟和免疫功能的关系；体外研究PD-Ls表达在DC分化成熟和免疫功能中的调控作用，检测DC膜Toll样受体（TRL2、TLR4）、胞内Akt1、ERK2和STAT3等信号蛋白以及核因子NF-κB等的改变，以探讨PD-Ls在DC分化成熟中的作用和机制；研究在体阻断PD-Ls对脓毒症小鼠DC成熟、免疫功能和上述信号分子表达的影响。通过上述研究，力图阐明PD-Ls在脓毒症DC成熟障碍中的作用与机制，为未来通过PD-Ls调节DC功能用于脓毒症免疫抑制的防治提供理论和实验依据。

脓毒症是严重创伤、烧伤、感染等引起的全身炎症反应综合征。尽管早期液体复苏、新型抗生素治疗、代谢支持及重要器官支持治疗已取得显著进展，但脓毒症及其严重并发症脓毒性休克和多器官功能障碍综合征的病死率仍居高不下。目前研究认为脓毒症导致的免疫抑是脓毒症及其严重并发症MODS病死率高的主要原因。.DC成熟障碍和功能紊乱是脓毒症免疫抑制的重要因素之一。脓毒症时，DC表达共刺激分子下调，分泌细胞因子发生改变转变，此外， DC也发生凋亡，存活DC吞噬凋亡DC后可抑制DC的成熟并诱导调节性DC（DCreg）和Treg的产生，进而促使机体进入免疫抑制状态。.新型共抑制分子程序性死亡受体-1(PD-1)与其配体 PD-L1或PD-L2结合可传递负性调控信号。 PD-1/PD-Ls通路在慢性病毒感染、肿瘤免疫、自身免疫性疾病等T细胞反应的形成及维持中发挥重要的负性调控作用。脓毒症作为一种细菌和（或）真菌感染状态，存在T细胞无反应和T细胞凋亡增多的现象。为此我们推测脓毒症时，DC表面共抑制分子的表达水平变化可能参与调控DC功能的变化。.在本研究中，我们首先从脓毒症患者入手，明确脓毒症患者DC的功能变化与PD-Ls变化的关系；接着离体构建不同PD-Ls表达水平的DC细胞株，体外探索PD-Ls表达水平与DC成熟状态的关系，PD-Ls是否能够调控DC分泌细胞因子，诱导T细胞增殖及分化的能力及其潜在的可能机制；最后再次回归到体内研究，通过腹腔给予脓毒症小鼠阻断性抗体，探讨阻断PD-1/PD-Ls通路对DC功能的影响。.本研究结果表明：随着脓毒症病情的进展，脓毒症患者外周血DC表面PD-Ls的表达水平逐渐升高，且与DC的功能呈正相关。体外研究证实：PD-Ls的表达水平与DC成熟状态相关。高表达PD-L1能够抑制DC分泌细胞因子的能力，减少DC诱导T细胞增殖的能力，增加诱导Treg细胞分化的百分比。这说明PD-L1通路对DC细胞有着负性调控作用，其可抑制DC的正常功能，诱发DC细胞功能异常，从而影响机体的正常免疫应答过程。而Akt、ERK信号蛋白参与了PD-L1调控DC细胞功能的过程。.总之，免疫抑制是脓毒症晚期患者死亡的主要原因。通过对PD-Ls通路与DC功能进行研究，有利于寻找到与DC正常成熟及功能相关的靶点，以调控DC功能，调控机体免疫应用于免疫治疗，具有广阔的临床和科研应用前景。