鹿茸补肾汤对骨关节炎软骨细胞Notch信号通路及相关作用机理研究

The primary or secondary changes in osteoarthritis which relateddenaturalization, softening, or disappearance of rticular cartilages, is the lesiontriggers the pathological variations of osteoarthritis.Notch signal pathways recritical in regulating the proliferation and ifferentiation of artilage cells, also maintaining the cell phenotype and the metabolic balance of cartilage matrix has been published in both domestic and internationaljournals.Unfortunately the detailed echanism is still unclear.In the traditional Chinesemedical science, osteoarthritis is defined as "rheumatism" or "heumatism", which caused by deficiency of the kidney essence.Our research has extractedapolypeptide from antlerwhich could onifykidneys, also proved toprotect the cartilage and reverse the oxidative damages of cartilagecells.Based on the theory of "kidney herapy to treat the rheumatism", raised byProf. Liu Bailing, the great traditional Chinese medical master and the leader ofschool of Tian Chi Shang Ke, we studied the Notch signal athways.Byexamining the Notch signal pathways in the cartilage cells, we have discussed theeffects on the Notch signal pathways from antler kidney notifying soup and unveiled detailed process.We also studiedthe mechanism of acceleratingcartilage cellsrehabilitate.All the results haveprovided the experimental foundation to determine the effective target of theantler kidney notifying soup to resist cartilage cell damages.

骨关节炎病理是关节软骨出现原发性或继发性改变和由此导致的变性、软化以至逐渐消失。故关节软骨病变为骨关节炎病理演变的出发点。目前国内外研究发现，Notch信号通路在调控软骨细胞增殖、分化，维持软骨细胞表型，以及软骨基质代谢平衡方面具有重要作用，但对于其具体作用机制尚未阐明。骨关节炎属于中医的“痹症、骨痹”，为肾精不足的体现，本课题组初期对补肾药鹿茸提取物鹿茸多肽研究，证实鹿茸多肽对软骨有一定的保护作用，且可逆转软骨细胞的氧化损伤。因此我们依托国医大师刘柏龄教授“治肾亦即治骨”理论为首的天池伤科流派，以Notch信号通路为切入点，通过检测软骨细胞中Notch信号通路的相关作用机理，探讨以鹿茸补肾汤对Notch信号通路的干预作用，找出对其信号通路具体环节和促进软骨细胞修复的疗效机制加以阐释，为初步证实鹿茸补肾汤防治软骨细胞损伤的作用靶点提供实验基础。

膝骨性关节炎是一种常见的慢性、进展性骨关节病。到目前为止，还没有一种可以改变或终止骨关节疾病进程的有效治疗方法。本项目针对骨关节炎疾病特点，通过全新针刀造模对比常规HULTH造模获得实验动物膝骨关节炎模型，给予鹿茸补肾汤（国医大师刘柏龄的补肾汤方为基础上，加入鹿茸为君药）干预治疗，在不同治疗节点观察膝关节形态学、血常规和生化指标变化，以及相关组织细胞的分子生物学和蛋白质组的差异表达。用药前后的行为学改变提示，鹿茸补肾汤在缓解关节肿胀、局部刺激、步态反应和关节活动范围中均显示出治疗效果，且明显优于单纯补肾汤组。且以1.5倍为差异表达变化阈值，在定量到的蛋白质中，发现在鹿茸补肾汤与模型组比较中有45个蛋白表达发生上调，31个蛋白表达发生下调。. 鹿茸是哺乳动物中唯一可再生的骨组织，然而骨肿瘤细胞对于骨骼及其周围软组织破坏较大、不易修复。在鹿茸对于骨细胞探索中发现鹿茸多肽对于骨肿瘤细胞的迁移也具有一定抑制的作用。干预后的骨肿瘤细胞增殖受到抑制，迁移速度减缓，并呈现成骨转化倾向，恶化程度和扩散速率均有效降低。提示鹿茸多肽具有杀伤肿瘤细胞的生物活性，可为其进一步作为主要成分，开发抗癌药物提供实验依据。中药材有效成分的不确定与农药、重金属等有害物质的残留量超标，是中药跻身世界的两大障碍。课题对不同产地鹿茸及其不同区段的六六六等农药残留和铅铜等重金属进行了检测，发现动物类中药材可因食物链蓄积与加工技术不规范等因素造成其有害物质的残留量超标。. 项目成功初步揭示鹿茸补肾汤以及鹿茸有效成分对膝骨性关节炎软骨细胞、骨肿瘤细胞等存在着显著影响，拟阐明NOTCH和TGF-β信号通路可能是骨疾病的关键信号途径，为形成有效中药活性成分治疗膝骨关节炎的临床应用提供新的治疗靶点。