宿主蛋白亲环素A在A型流感病毒复制过程中的调节功能研究

高致病性禽流感是当前我国和全球面临的严峻挑战，深入探讨A型流感病毒进入宿主细胞后的感染机理，是摆在我们面前的一项必要而迫切的任务。我们的前期研究发现宿主蛋白亲环素A能够与A型流感病毒的M1蛋白相互作用，过表达后能够抑制流感病毒的复制。本项目将通过反向遗传学操作技术、间接免疫荧光和Real-time PCR等方法，利用新获得的敲除亲环素A的293T细胞系，在分子水平上进一步阐明宿主蛋白亲环素A在A型流感病毒复制过程中的详细调节机制。研究内容主要包括：细胞水平亲环素A敲除对流感病毒增殖能力，病毒转录、翻译和组装等复制过程，以及对M1蛋白在流感病毒不同感染阶段细胞内定位的影响；细胞内亲环素A对流感病毒粒子特性的影响；不同种属细胞内亲环素A的含量对A型流感病毒增殖能力的影响。本研究将为深入理解流感病毒的感染和致病机理，设计小分子抗病毒药物提供良好的依据。

亲环素A(CypA)是亲环素超家族成员，具有肽脯氨酰顺反异构酶活性，参与多种病毒的复制。前期研究发现能够CypA与A型流感病毒的M1蛋白相互作用，抑制病毒的复制。为了进一步阐明宿主蛋白CypA在A型流感病毒复制过程中的详细调节机制，本项目利用敲除CypA的293T细胞系开展了一系列的研究。研究结果表明，CypA能够抑制病毒复制的起始，缺失CypA后病毒的感染性增强。CypA对病毒基因组的转录和复制过程没有影响，其对流感病毒的抑制作用发生在蛋白质水平。进一步研究发现，CypA能够通过泛素-蛋白酶体途径来加速M1蛋白的降解。因此我们推断，CypA是通过加速M1蛋白的降解来实现其对流感病毒复制的抑制作用。本研究将为深入理解流感病毒的感染和致病机理，设计小分子抗病毒药物提供科学依据。