重组钙网蛋白激活调节性B细胞及机制研究

B细胞是机体免疫系统的重要组成部分，除了产生体液免疫应答，还发挥重要的免疫调节作用，大量研究证明体内存在一群对免疫应答发挥负性调节作用的B细胞，即调节性B细胞。IL-10是调节性B细胞活化后的标志性细胞因子并介导其免疫调节功能的发挥，但目前尚不清楚调节性B细胞在体内的产生及激活机制。钙网蛋白（Calreticulin,CRT）是与免疫细胞密切相关的自身蛋白质，前期的研究发现，重组CRT能够在体外刺激B细胞增殖和分泌IL-10，推测CRT可能参与调节性B细胞在体内的激活及免疫调节功能的发挥。拟研究重组CRT对调节性B细胞在体内外的诱导、扩增的影响；以腹腔给药重组CRT体内激活调节性B细胞的方式检测对机体细胞和体液免疫应答的抑制作用；并重点研究CRT激活调节性B细胞的分子机制：关键功能结构域和信号通路。从而理解调节性B细胞在体内的产生、激活，以及发挥免疫调节功能的规律。

钙网蛋白（CRT）是内质网中的经典蛋白质，但是在病理情况下也可以出现在细胞外环境中。可溶性CRT出现在类风湿关节炎（RA）病人的血液和关节液中，并且其浓度和疾病活动度呈正相关，提示CRT可能在自身免疫紊乱的发生发展中起作用。我们前期的研究发现，原核重组表达的CRT片段39-272（rCRT/39-272）具有重要的免疫生物学活性，对小鼠T细胞没有直接的刺激作用，但却可以强烈激活小鼠B细胞，刺激其增殖和分泌IL-10。腹腔注射rCRT/39-272可以抑制C57BL/6小鼠实验型自身反应性脑脊髓膜炎（EAE）的发生，干扰体内自身抗原反应性Th1/Th2细胞的平衡。我们推测rCRT/39-272可能激活了产生IL-10的调节性B细胞（Breg），从而发挥了对T细胞免疫应答的免疫调节作用。本课题对这一假说进行了验证，研究发现，rCRT/39-272可以直接激活并扩增具有CD1dhiCD5+表型的Breg细胞，刺激其分泌IL-10，并且可以促进其进一步向抗体分泌细胞（ASCs）分化，上调浆细胞特异的转录因子xbp1，irf4和blimp1的表达并下调pax5和bcl6的表达；rCRT/39-272对CD1dhiCD5+Breg细胞的激活依赖于CD14/TLR4通路；rCRT/39-272激活的CD1dhiCD5+Breg细胞在体外可以促进初始T细胞向Th2细胞分化；腹腔注射rCRT/39-272可以抑制EAE小鼠自身抗原MOG35-55特异性Th1细胞的分化；过继转移rCRT/39-272激活的CD1dhiCD5+Breg细胞可以抑制小鼠EAE的发病。本研究揭示出可溶性rCRT/39-272具有重要的免疫调节活性，可以通过激活CD1dhiCD5+Breg细胞产生IL-10并诱导其进一步分化为ASCs（产生多反应性的自身抗体），进而调节T细胞介导的炎症性免疫应答，提示病理情况下出现在体液中的可溶性CRT可能在体内发挥重要的免疫调节作用。