逆转乳腺癌他莫昔芬耐药的分子开关：LncRNA-RP11-513M16.8的作用与机制研究

Using lncRNA array technology, we found that RP11-513M16.8 significantly up-expressed in the TAM-resistance breast cancer cells. Previous study revealed that up-regulating RP11-513M16.8 could promote cancer cells proliferation and enhanced cells resistance to tamoxifen. We predicted rpS6 as a potential target gene of RP11-513M16.8 by employing lncRNA target gene prediction software. It is reported that rpS6 could induce tamoxifen resistence in breast cancer.We hypothesized that RP11-513M16.8 might be involved in the endocrine resistance of breast cancer through rpS6. In this study, we will further uncover the biology characteristics of RP11-513M16.8 and detect the effect of RP11-513M16.8 on the breast cancer endocrine resistance through over-expression and down-expression strategies. We use rpS6 as clue to explore the undergoing molecular mechanism of RP11-513M16.8 which induced breast cancer endocrine resistance . There was few information about the relationship between RP11-513M16.8 and breast cancer endocrine resistance .This study will provide a potential intervention target for reversing the endocrine resistance for the breast cancer therapy.

RP11-513M16.8是我们采用芯片技术筛选获得、高表达于乳腺癌他莫昔芬（Tamoxifen, TAM）耐药细胞中、功能未知的lncRNA。前期结果表明：RP11-513M16.8过表达促进乳腺癌细胞增殖、增强细胞的耐药性；生物信息学及预实验结果提示rpS6可能为其下游靶基因；文献报道rpS6与乳腺癌TAM耐药密切相关。据此，我们提出“RP11-513M16.8可能通过rpS6影响乳腺癌耐药性”的科学假说。本课题拟阐明RP11-513M16.8在乳腺癌中的表达规律；采用过表达/沉默策略和挽救策略，系统论证RP11-513M16.8通过rpS6调控乳腺癌TAM耐药性的分子机制。由于RP11-513M16.8在乳腺癌耐药方面尚无报道，因此本课题具有源头创新性，并有可能为逆转乳腺癌TAM耐药提供潜在的新靶标。

乳腺癌是全世界女性癌症死亡的主要原因。尽管早期乳腺癌治愈率较高，但是复发和转移性乳腺癌患者的预后仍然较差，因此亟需深入探究乳腺癌新的发病机制和潜在治疗靶点。已有数据表明长链非编码核仁小RNA宿主基因1(SNHG1)与多种肿瘤的发生、发展具有显著相关性，但其在乳腺癌发生发展中的作用和机制未有报道。本研究中，我们发现与癌旁组织相比，86例乳腺癌组织中有56例乳腺癌组织中SNHG1表达升高；SNHG1在4种乳腺癌细胞系中表达水平也显著升高，在MDA-MB-231细胞升高最为显著。SNHG1在肿瘤≥5cm乳腺癌中表达高于肿瘤＜5cm样本，淋巴结阳性患者SNHG1表达高于淋巴结阴性。敲低SNHG1可显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖能力，增加细胞凋亡，降低细胞的迁移和侵袭能力。动物实验也证实敲低SNHG1可以显著抑制乳腺癌的生长和转移能力。生物信息学数据库预测发现miR-193a-5p可能是SNHG1的潜在靶基因之一，在MDA-MB-231细胞中抑制SNHG1会增加miR-193a-5p表达，转染miR-193a-5p mimic则抑制了SNHG1的表达。此外，miR-193a-5p mRNA水平在肿瘤组织中的表达相对配对的正常组织较低，并且SNHG1与miR-193a-5p表达显示显著的负相关性。接下来我们预测了miR-193a-5p的靶基因，并将其中HOXA1选为推测靶点。双荧光素酶实验表明MiR-193a-5p可抑制HOXA1野生型3'UTR的荧光素酶活性，而不能抑制HOXA1突变体3'UTR的荧光素酶活性，提示HOXA1与miR-193a-5p具有相互作用关系。Western blot证实转染miR-193a-5p模拟物后HOXA1表达下调。接着，我们在MDA-MB-231细胞中敲低SNHG1，发现HOXA1荧光素酶活性受到抑制且蛋白表达水平下降。说明SNHG1与HOXA1之间存在轴性调控关系。最后，我们在SNHG1敲低的MDA-MB-231细胞中过表达HOXA1，可以逆转敲低SNHG1引起的增殖抑制效应，逆转敲低SNHG1引起的细胞凋亡率增加，而且可以逆转细胞迁移和侵袭能力的下降。本研究首次证明了SNHG1通过“海绵吸附”miR-193a-5p激活HOXA1的表达，并促进乳腺癌细胞的增殖和转移，从而为乳腺癌发生发展的机制研究提供了新思路。