TSLP介导的Th9反应在鼻息肉中的作用机制研究

The mechanism of nasal polyps is now not quite clearly. Recently, it has been known that a distinct population of IL-9-producing‘Th9’ helper T cells can exist. Lessons from human and animal studies demonstrated that IL-9 can enhance the allergic airway inflammation, while, TSLP can mediate the T cell immunity, so we supposed that the TSLP-mediated Th9 response may play an important role in the inflammation of nasal polyps. We will first clarify the Th9 response in Eos or non-Eos CRSwNP; second, mDCs and pDCs derived from Eos or non-Eos CRSwNP tissues were incubated respectively with naïve CD4+T cells to detected the differentiation of Th9 cells, the mainly functional subtypes of DCs and the effect of TSLP on Th9 differentiation in vitro; third, the naïve CD4+T cells were incubated with IL-4/TGF-β1 plus anti-IFN-γ in the present of TSLP in vitro to identify the directly effect of TSLP on Th9 differentiation; at last, the importance of Th9 response in the inflammation of NP was detected by PU.1(Th9 nuclear transcription factor ) gene knock out animal models or the injection of Anti-IL-9 into the NP animal models. And we will investigate whether TSLP prime the NP inflammation through mediate the Th9 differentiation in vivo. In a word, we will demonstrate the real exactly molecule mechanism that the effects of TSLP-DCs-Th9 axis or TSLP-Th9 response on nasal polyps in order to explore a new way for the therapy of nasal polyps.

鼻息肉的发病机制尚不清楚。近来研究表明主要分泌IL-9的Th9在呼吸道变态反应中起促炎作用，而TSLP在变态反应中调控T细胞免疫，我们推测TSLP可能介导Th9反应在鼻息肉发病中起重要作用。我们拟1.明确Th9在不同类型鼻息肉中的表达；2.不同类型鼻息肉的DCs与初始CD4+T细胞共培养，探讨Th9分化情况及起主要作用的DC类型，TSLP预处理DCs，观察TSLP通过DCs对Th9的间接调控；3.体外诱导Th9分化，给予TSLP刺激，观察TSLP对Th9的直接作用；4.建立Th9核转录因子基因敲除的鼻息肉小鼠模型或利用抗体封闭的方法，检测Th9功能缺失对NP形成及炎症程度的影响；给予TSLP刺激，检测TSLP对NP炎症的调控是否通过Th9实现。本研究立图明确TSLP-DC-Th9细胞轴或TSLP-Th9反应在NP中的调控作用及具体机制，为NP发病机制的研究提供新思路，为治疗开辟新途径。

鼻息肉的发病机制尚不清楚。近来研究表明主要分泌IL-9的Th9在呼吸道变态反应中起促炎作用，而TSLP在变态反应中调控T细胞免疫，因此我们推测TSLP可能介导Th9反应在鼻息肉发病中起重要作用。我们的研究表明，Th9（IL-9的水平）及核转录因子IRF-4、PU.1的表达在不同类型的NP和对照组的外周血无明显差异，但是在NP组织中较对照组上调，在EosNP较Non-EosNP有上调趋势，但无统计学差异。IL-9阳性的细胞主要分布于间质，IL-9主要表达在淋巴细胞的表面，进一步以双染的方法检测发现，表达IL-9的细胞主要为CD4+T细胞。mDC和pDC均可以促进Th9的分化，其中Eos CRSwNP中分离的mDC促进Th9分化的效应最强,相比于Non EosCRSwNP, Eos CRSwNP来源的DC促进Th9分化的效应较强。TSLP预刺激的DCs对Th9分化的研究结果发现：TSLP可以显著促进mDC诱导的Th9的分化，第5天分化达顶峰，同时还促进Th2的分化，但对Th1分化的作用不显著。体外实验研究发现TSLP可以直接促进Th9的分化，同时促进Th2的分化。总之，NP中不同类型的DC均可以促进Th9的分化，其中Eos CRSwNP来源的mDC作用最强，mDC较pDC促进Th9分化的作用更强；TSLP可以通过刺激DC间接或直接作用于初始CD4+T细胞促进Th9的分化，同时也通过DC间接促进Th2的分化，但无直接作用。体内实验表明，IL-9或IL-4或Th9表达缺失，可明显减轻NP小鼠的鼻黏膜炎症程度，Th9功能缺失时TSLP仍可通过调控DC来诱导Th2反应，进而加重NP小鼠模型的鼻黏膜炎症。