复合型非病毒基因载体的构建及其运载机制研究

目前，基因治疗最大的困难之一是缺乏高效低毒的基因载体，而且其运载基因的分子机制尚不清楚，极大地限制了基因治疗的发展。本项目针对非病毒基因载体的研究现状，利用壳聚糖压缩基因的特性及其生物相容性，基于阳离子脂质体的双层膜结构，分别结合pGFP-N2和pGL3两种质粒，通过分子自组装技术构建一类复合型非病毒基因载体。采用粒度分析仪、扫描电镜、透射电镜和原子力显微镜等手段观测复合载体的粒径分布和形态结构，利用延滞技术考察复合载体与质粒DNA的结合能力。将该复合载体用于转染细胞，研究其运载基因的能力，用MTT法评估其细胞毒性。通过将细胞核、脂质体和质粒DNA用荧光探针进行标记，使用显微镜技术观察载体进入细胞的过程，追踪复合载体各组分的胞内行为，从分子水平上研究复合载体运载基因的机制。本项目可为基因治疗提供高效低毒的复合型非病毒基因载体，并为进一步探索非病毒基因载体运载基因的分子机制提供依据。