调和肠胃方预防伊立替康所致迟发性腹泻的机理研究

Irinotecan causes severe diarrhea as the main dose limiting toxicity. Recent studies revealed the UGT1A1*28 gene polymorphism was associated with the high incidence of irinotecan-related diarrhea. No effective preventive measures for it can be available at present. Preclinical ang clinical studies showed that Shengjiang Xiexin Decoction could improve the intestinal mucosa injury in rats, and prevent delayed diarrhea caused by irinotecan. The purpose of this study is to explore the mechanism of Shengjiang Xiexin Decoction on preventing irinotecan-induced delayed diarrhea. We plan to establish a rat model of delayed diarrhea induced by irinotecan, analysis the function of the compound herbs on the expression of UGT1A1 mRNA in liver, test the activities of β-glucuronidase in intestine, observe the proliferation and apoptosis of intestinal epithelial cell and study the expression level of intestinal stem cell marker, by the methods of RT-PCR, Saito and immunohistochemistry. It has a great significance of both theoretical and practical to clarify the targets and mechanism of Shengjiang Xiexin Decoction on preventing irinotecan-related diarrhea, which can provide scientific basis for the clinical application of Chinese herbs on preventing chemotherapy-related diarrhea.

迟发性腹泻为伊立替康的剂量限制性毒性，而UGT1A1*28基因多态性患者发生重度腹泻的风险增大，目前西医尚未找到满意的预防措施。我们的前期研究发现，中药调和肠胃方生姜泻心汤能有效预防和减轻伊立替康所致迟发性腹泻，改善肠粘膜损伤，但其作用机理研究有待进一步深入。本课题拟利用伊立替康诱导的迟发性腹泻大鼠模型，分别采用荧光实时定量RT-PCR、Saito酶活性检测和免疫组织化学等技术，多靶点、多层次地观察生姜泻心汤对肝脏代谢酶UGT1A1表达，肠道β-葡萄糖醛酸酶活性，肠粘膜细胞凋亡、细胞增殖、肠干细胞标志物表达水平的调节作用，分析和研究生姜泻心汤对伊立替康肠毒性不同环节的干预作用。阐明生姜泻心汤预防伊立替康迟发性腹泻的作用靶点及机理，对于该古方今用具有理论意义和实际价值，为临床使用中药预防化疗性腹泻提供科学依据。

伊立替康（Irinotecan，CPT-11）在临床上可用于多种恶性肿瘤的化疗，但迟发性腹泻的毒副作用却限制了其应用。目前西医尚无标准有效的防治方法。我们在临床实践中，发现中医调和肠胃方生姜泻心汤对CPT-11 肠毒性具有显著预防作用。本研究项目旨在对生姜泻心汤预防迟发性腹泻的作用靶点和机制做进一步的研究，为中药预防化疗性腹泻提供科学依据。.中药的作用具有多靶点的特点，探索生姜泻心汤在不同靶点抑制化疗性肠毒性的作用，是阐明对肠毒性预防机理的关键。根据CPT-11的代谢及其肠毒性的发生机制，利用 CPT-11 腹泻大鼠模型进行体内试验，从调节肝脏UGT1A1酶、肠道β-葡萄糖醛酸酶以及促进肠粘膜自身修复机能三个环节进行研究。.实验结果显示，生姜泻心汤可有效减轻伊立替康所引起的体重下降，促进注射伊立替康后大鼠的进食，同时降低伊立替康所引起的腹泻级别和评分；生姜泻心汤还可修复伊立替康引起的肠粘膜病理性损伤；并通过比较对照组和中药组肠道caspase3酶活性（0.68±0.19 vs 1.00±0.17，P＜0.01），证明生姜泻心汤可抑制肠道细胞凋亡；生姜泻心汤还能促进肠道细胞（包括肠道干细胞）的增殖（PCNA阳性细胞数: 531.20±101.64 vs 312.40±43.23，P＜0.01；肠道干细胞标志物CD44的IOD值：613.04±102.42 vs 360.99±156.87，P＜0.01；Lgr5的表达：1.75±0.53 vs 0.56±0.54，P＜0.01）；此外，生姜泻心汤还降低了肠道中β-葡萄糖醛酸酶活性（11.62±1.78 vs 16.09±1.40，P＜0.01），减少了肠道中伊立替康失活产物SN38G转化为活性产物SNN-38，从而降低了肠毒性的发生。.本项目从大鼠一般状况、肝脏代谢酶、肠道微环境、肠道细胞增殖与凋亡等多层次，采用免疫组化、分子生物学等现代检测手段，探索生姜泻心汤防治伊立替康所致迟发性腹泻的潜在作用靶点和机理，论证了中医药疗效的科学性，为中医药的临床应用提供了可靠的依据。