AchR-DEC205偶联抗体靶向未成熟DC诱导免疫耐受治疗重症肌无力的研究

重症肌无力(MG)是由自身抗体介导、T细胞依赖的器官特异性自身免疫性疾病，其发病的关键在于乙酰胆碱受体（AchR）自身耐受的打破；树突状细胞(DC)作为专职的抗原递呈细胞，在诱导和维持机体免疫耐受中发挥着重要作用。通过DC恢复或重建AchR自身耐受，可最终为MG的治疗提供有效方法。前期本课题组已经成功表达了人AchR α1亚单位胞外段（Hα1-210）蛋白，在此基础上，本研究拟通过化学的方法将Hα1-210与DC表面特异性受体-DEC205单克隆抗体偶联，合成Hα1-210-DEC205偶联抗体，体内将自身抗原特异性靶向未成熟DC，诱导AchR特异性免疫耐受的形成。本研究首次提出通过DEC-205受体体内靶向未成熟DC诱导AchR免疫耐受的新策略，有望获得对MG有良好治疗效果的新分子-Hα1-210-DEC205偶联抗体，建立特异性治疗自身免疫性疾病的新技术平台。

重症肌无力(MG)是典型的由自身抗体介导、T细胞依赖、补体参与的器官特异性自身免疫性疾病，乙酰胆碱受体（AChR）自身耐受的打破是其发病的关键所在；树突状细胞(DC)作为专职的抗原递呈细胞，依据其表型及功能的不同，在免疫应答中发挥着不同作用；未成熟DC（iDC）可通过多种方式诱导抗原特异性T细胞耐受，因此，以iDC为靶点诱导免疫耐受已成为治疗自身免疫性疾病的一个新的策略。本课题将MG自身抗原AchRα1亚基 97-116肽段与DC表面特异性受体CD-205单链抗体(scFv)进行融合表达，即融合单链抗体AChRα1-scFv205，通过SDS-PAGE以及Western blot对融合单链抗体的表达进行鉴定；同时我们从B6鼠骨髓中诱导培养iDC，与成熟DC（mDC）相比，其表面低表达MHC-II分子、CD80、CD86及CD40。体外细胞系试验证实AChRα1-scFv205与iDC具有较高的亲和力；混合淋巴细胞反应（MLR）结果显示：融合单链抗体早期可促进AChR特异性T细胞增殖；为进一步观察融合单链抗体体内靶向iDC，我们对其进行生物素标记，通过静脉注射的方法作用于EAMG小鼠，24小时后制备脾冰冻切片，免疫荧光染色发现AChRα1-scFv205与CD11c+DC共定位于脾脏，提示其体内可特异性靶向DC；我们分别在融合蛋白作用后第7、21天，MACS分选脾CD11c+DC以及CD4+T细胞，行混合淋巴细胞反应；与体外结果一致：AChRα1-scFv205早期可促进AChR特异性T细胞增殖，后期T细胞增殖明显下降；同时，我们发现AChRα1-scFv205可诱导CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞产生，且升高耐受型细胞因子IL-10、TGF-β的水平。我们对AChRα1-scFv205作用后脾CD11c+DC行表面分子染色，FCM结果显示：融合蛋白作用组DC表面MHC-II分子、CD80、CD86及CD40的表达较其他组降低，提示其在体内仍可维持其未成熟表型。本研究结果提示：融合单链抗体AChRα1-scFv205可抑制抗原特异性T细胞增殖，并通过诱导Treg细胞而发挥免疫耐受作用；本研究首次提出通过CD-205scFv体内抗原靶向iDC诱导AChR免疫耐受的新策略，有望对MG以及其他自身免疫性疾病提供新的治疗策略！