基于益肾散结复方对MSCs归巢和旁分泌作用探讨益肾散结配伍的科学内涵

Chronic kidney disease is a major disease which can seriously harm to human health and its common pathological condition of progression to ESRD is renal interstitial fibrosis, so to explore effective means and mechanisms of treatment of renal fibrosis has been a hotspot scientific issue in related fields. Shenfukang Ⅱhave a positive effect in clinical treatment of renal interstitial fibrosis. The result of the preliminary experiment shows that yishen sanjie compound plays a role in promoting transplanted MSCs secretion HGF and inhibiting renal interstitial fibrosis. This project is intended to disassemble compound according to prescription form on the basis of “yishen sanjie”, and target SDF-1 and HGF, by the methods with MSCs transplantation, SiRNA inhibition of the expression of its receptor transplantation, from a different point and different level , We can study the differential expression on SDF-1/CXCR4 and effects on MSCs homing, and the differential expression on HGF/c-Met and effects on MSCs paracrine.The above results can reveal the mechanism of yishen sanjie compound on renal interstitial fibrosis by MSCs homing and paracrine and can find the targets of yishen theorem and sanjie theorem, providing with experimental evidence to illuminate the scientific connotation of yishen sanjie compatibility.

慢性肾脏病是严重危害人类身体健康的重大疾病，其进展至终末期肾病的共同病理状态是肾间质纤维化，探索治疗肾间质纤维化的有效手段及其机制一直是相关领域的热点科学问题。肾复康Ⅱ号临床治疗肾间质纤维化有肯定的疗效，实验证实其具有促进移植后MSCs分泌抗纤维化因子HGF抑制肾间质纤维化的作用，但其确切机制及作用靶点尚不明确。本课题拟以肾复康Ⅱ号"益肾散结"的组方原则拆方，以SDF-1/CXCR4和HGF/c-Met为靶点，通过MSCs直接和SiRNA抑制受体表达后移植的方法，从不同时间点、不同水平研究复方组、益肾组、散结组、单纯移植组中SDF-1/CXCR4的差异表达及其对MSCs归巢的影响，HGF/c-Met的差异表达及其对MSCs旁分泌作用的影响，揭示益肾散结复方作用于MSCs归巢和旁分泌因子抗肾间质纤维化的机制，寻找益肾、散结药物的作用靶点，冀为阐明益肾散结配伍的科学内涵提供实验依据。

慢性肾脏病是严重危害人类身体健康的重大疾病，其进展至终末期肾病的共同病理状态是肾间质纤维化，探索治疗肾间质纤维化的有效手段及其机制一直是相关领域的热点科学问题。间充质干细胞因其具有自我更新、多系分化、高度增殖、易于分离培养扩增、移植时不存在组织配型、无免疫排斥及伦理等特性，日益成为细胞移植和组织工程中的理想种子细胞。近年来的研究表明，移植后MSCs的旁分泌功能是其发挥治疗作用的关键，也是迄今仍未解决的难题。肾复康Ⅱ号是临床治疗肾间质纤维化有肯定疗效的中药，本课题采用肾复康Ⅱ号联合MSCs移植的方法观察其对MSCs归巢和旁分泌功能的作用，结果显示肾复康Ⅱ号可显著改善移植MSCs后实验大鼠肾脏功能，且其含药血清可明显上调MSCs分泌的SDF-1、HGF的表达，提示肾复康Ⅱ号具有促进MSCs分泌趋化因子和抗纤维化因子抑制肾间质纤维化的作用。通过制备肾复康Ⅱ号颗粒、益肾组颗粒、散结组颗粒，观察其对肾间质纤维化模型大鼠的作用，ELISA、实时定量PCR、Western blot方法检测不同药物组对MSCs归巢和旁分泌功能，结果显示，肾复康Ⅱ号中的益肾药物作用于SDF-1及其受体CXCR4，散结药物作用于HGF及其受体c-Met，两者协同抑制肾间质纤维化的作用更强。此外，本研究还应用肾复康Ⅱ号联合MSCs移植、肾复康Ⅱ号联合CXCR4和HGF受体拮抗剂抑制MSCs CXCR4、HGF表达后再移植的方法，通过免疫组化、Western blot、实时定量 PCR、 ELISA 等技术方法探索肾复康Ⅱ号对植入MSCs的调控作用与机制, 结果显示，肾复康Ⅱ号促进移植MSCs归巢和旁分泌HGF是其发挥治疗作用的机制。本研究的完成，探索了肾复康Ⅱ号对MSCs的调控作用与机制，明确了益肾、散结药物的作用靶点，为应用益肾散结法抑制肾间质纤维化提供了理论和实验依据。