鹦鹉热衣原体感染后DC和IL-10诱导鸡脾脏T淋巴细胞凋亡的分子机制

The apoptosis-mediated strategy triggers pathogen proliferation and clearance.It is regarded as the main mechanism against infectious disease.In our pilot study, suppression of immune organs, reduction of lymphocytes proliferation and a significant apoptosis of spleens were observed post infection with Chlamydia psittaci(C.psittaci)in chickens. Our hypothesis is the Th1 immunosuppression elicited by CD4+ T cell apoptosis is associated with the involvement of dendritic cells (DCs) activation, IL-10 and activation of Nod-like receptor 1 (NOD1) and RIP2. In current study, we will detect the lymphocyte proliferation and apoptosis by DCs and IL-10 involvement. Also, expression of NOD1 and RIP2 will be monitored post infection with C.psittaci.Furthermore, the proliferation and apoptosis of the T lymphocyte cells will be evaluated post incubating with NOD1-siRNA,anti-IL-10 antibody and anti-ICOS-Lantibody, the potential role of DC and IL-10 will be evaluated to identify above hypothesis.

被感染的宿主细胞凋亡有利于阻断病原的复制及清除被感染的细胞，被认为是宿主防御病原感染的一种重要机制。我们前期试验发现鹦鹉热衣原体（Chlamydia psittaci, C.psittaci）感染后诱导家禽免疫器官萎缩和T淋巴细胞增殖降低以及显著的脾淋巴细胞凋亡。我们推测“C.psittaci 通过树突状细胞（Dendritic cells,DCs)和IL-10作用，启动了NOD1/RIP2效应反应，诱导了抑制T淋巴细胞增殖，促进了T淋巴细胞凋亡，抑制了Th1免疫反应“。本项目拟进行以下研究：（1）首先分析C.psittaci感染后IL-10分泌上调激活NOD1受体，导致DC细胞成熟免疫耐受，抑制脾T淋巴细胞增殖以及诱导细胞凋亡；（2）在以上基础上，构建T淋巴细胞NOD1基因沉默型PAMPs以及阻断IL-10分泌、DC细胞的成熟，观察T淋巴细胞增殖特点，验证以上假说。

鹦鹉热衣原体（Chlamydia psittaci,C. psittaci）是一种专性胞内人畜共患寄生菌，给养殖业造成严重的经济损失，并对人类公共卫生安全构成巨大威胁。鹦鹉热衣原体感染动物后可造成严重的免疫抑制，诱导衣原体的免疫逃逸，造成其它病原微生物的继发感染。目前对鹦鹉热衣原体造成机体免疫抑制的机制尚不清楚，缺乏针对衣原体感染的有效防控手段。本课题前期发现IL-10作为一种免疫抑制因子，在胞内菌及慢性感染中发挥重要作用，而树突状细胞（dendritic cells, DCs）作为机体内最重要的抗原呈递细胞，鹦鹉热衣原体感染后，IL-10对DCs和T淋巴细胞调节机制仍不清楚。围绕上述研究内容，本课题利用IL-10基因缺失小鼠、DCs条件型缺失小鼠和IL-10/DCs双缺失小鼠建立体内感染模型。通过分离小鼠骨髓来源的原代树突状细胞，以及初始T细胞建立体外共培养感染模型。研究结果表明：（1）鹦鹉热衣原体感染后，IL-10−/−小鼠存活率达到90%，、IL-10抑制剂处理小鼠存活85%，IL-10/DCs双缺失小鼠存活率为60%，对照组野生型小鼠存活率为60%，而DC缺失小鼠达到100%死亡，肺部伴随有严重的病理损伤和较高的衣原体载量，这提示DC缺失严重影响小鼠的存活，IL-10/DCs双缺失降低了小鼠的死亡数量。(2)体外模型研究可能机制是：IL-10−/−激活OX40-OX40L的上调表达，促进CD4+T的增殖，显著降低了indoleamine 2, 3-dioxygenase （IDO）和Treg的表达。此外，IL-10−/− 激活了NLRP3上调表达，有助于DCs的凋亡，加快了衣原体的清除。本研究表明IL-10-DCs双缺失小鼠存活率增加机制在于，IL-10−/−上调 OX40-OX40/ NLRP3，下调IDO-Treg功能，促进功能缺失型DCs 的活化和衣原体清除效率，进一步阐明了IL-10与DCs、T淋巴细胞的调节机制。IL-10、OX40-OX40L、NLRP3炎性小体是衣原体防控的潜在生物靶点。