液相微萃取富集-发光细菌法与色谱-质谱联用技术结合用于地沟油快速检测的新方法研究

The problem of drainage oil production and sale in China is more serious, and the table of the drainage oil has become one of the most serious food safety problems. But in the current, the effective rapid detection technique for drainage oil is absent, so it is important to explore and develop a method for fast, simple, effective, accurate identification of drainage oil. This project focuses on the search for a new method, which is simple, rapid and accurate, and rapid screening detection can be carried out for a large number of samples within a short time; and the samples which are positive in the screening can be further confirmed rapidly. A new method for rapid detection of drainage oil will be established, which based on the combine of liquid phase microextraction(LPME) and luminescent bacteria test, volatile components will be separated and enriched by headspace-single drop microextraction(HS-SDME), difficult volatile components will be extracted by ultrasonic assisted extraction, and then separated and enriched by dispersive liquid-liquid microextraction(DLLME), the respectively enriched samples will be tested by luminescent bacteria for rapid detection and screening, the resulting positive samples will be further identified and analysed with GC-MS for the volatile components and LC-MS/MS for the difficult volatile components. The established method will provide a good technical platform for the rapid screening and identification of the drainage oil, and also give a technical support for the detection of food safety.

国内地沟油制售问题较为严重，地沟油的餐桌化已成为国内最严重的食品安全问题之一。但目前国内缺乏有效的地沟油快速检测技术，因此探索并研究出一种快速、简便、有效、准确的鉴别地沟油的方法就具有重要的意义。本课题着眼于寻找一种简便、快速、准确的新方法，可进行快速筛选，短时间内检测大量样品；在初筛中呈现阳性的样品又能进行进一步的快速测定和确证。设想建立一种基于新型液相微萃取技术与发光细菌法相结合的快速检测地沟油的新方法，挥发性特征成分采用顶空单滴微萃取来分离富集，难挥发性特征成分先用超声辅助萃取进行提取，提取液再用分散液相微萃取富集，分别富集浓缩之后采用发光细菌法进行综合毒性快速检测与筛查，初筛结果呈现阳性的样品再结合GC-MS和LC-MS/MS分别进行挥发性特征成分和难挥发性特征成分的指纹图谱识别与分析。该方法的成功建立将会为地沟油的快速筛查与鉴定提供良好的技术平台，为食品安全检测提供技术保障。

国内地沟油制售问题较为严重，地沟油的餐桌化已成为国内最严重的食品安全问题之一。但目前国内缺乏有效的地沟油快速检测技术，因此探索并研究出一种快速、简便、有效、准确的鉴别地沟油的方法就具有重要的意义。针对地沟油中的挥发性特征成分，采用顶空液相微萃取的方法进行分离富集，在实验中研究了影响顶空液相微萃取的因素，并进行了条件优化。利用GC-MS针对其中的特异成分丁酸和己醛进行测定，从而达到鉴别地沟油的目的。将液相微萃取法与发光菌法联用，以明亮发光杆菌为检测生物，建立了快速检测地沟油的新方法。研究了菌液浓度、反应时间等实验条件对发光强度和发光抑制效果的影响。采用气相色谱-质谱测定所得丁酸和己醛线性关系，相关系数均大于0.99，地沟油样品中两种物质含量超出线性范围，杂牌油丁酸未检出，己醛浓度为2.21-3.22μg/ml。该方法检出限低、适用于微量地沟油检测。在2倍菌液的浓度下，反应时间为15min时，发光菌的发光效果最佳；绘制的氯化汞标准溶液曲线的线性方程为E=-4.160 C+0.834，r2=0.954，P<0.0。将E=50%代入该方程，得出氯化汞对明亮发光菌的EC50为0.08mg/L，硫酸锌代替氯化汞作为标准溶液对照，得到的标准曲线方程为E=-0.304 C+0.858，r2=0.953，P<0.05。将E=50%代入该方程，得出硫酸锌对明亮发光菌的EC50为1.18 mg/L；共测定十一个样品，其中样品1-4为三个品牌在保质期内的市售食用油样品，其中鹰唛玉米油对发光菌有明显的抑制作用，其他品牌油发光度无明显影响；样品5-9均为散装过期劣质食用油，大部分对明亮发光杆菌的发光强度有一定影响；样品10-11为地沟油样品，其相对发光度低至0.11%和0.12%，将其相对发光度代入硫酸锌标准曲线的线性方程中得出，其对明亮发光杆菌的急性毒性均相当于2.82mg/L的硫酸锌对明亮发光杆菌的急性毒性强度。本课题着眼于寻找一种简便、快速、准确的新方法，可进行快速筛选，短时间内检测大量样品；在初筛中呈现阳性的样品又能进行进一步的快速测定和确证。该方法的成功建立将会为地沟油的快速筛查与鉴定提供良好的技术平台，为食品安全检测提供技术保障。