子宫颈上皮内瘤变和子宫颈早期浸润癌血管形成表型的识别及青蒿素衍生物抗侵袭和血管形成的基础研究

新生血管形成"开关"的触发是子宫颈上皮内瘤变（CIN）进展和子宫颈癌发生过程中的关键事件，抗肿瘤血管形成已经成为新的治疗策略之一，但目前在CIN和子宫颈早期浸润癌中还缺乏有效方法来确定病变的血管形成表型，同时抗血管形成制剂多被国外垄断。本研究的第一部分利用三维能量彩色多普勒超声技术和造影超声技术检测CIN和早期子宫颈癌患者病灶的血管分布及血流，并用新型血管形成标记分子对切除的宫颈组织进行免疫组化染色评价微血管密度，以确定何种指标或方法更能准确判断CIN和早期子宫颈浸润癌的血管形成活性，为抗血管形成治疗筛选目标患者。第二部分是在体外培养的子宫颈癌细胞系（Hela和CaSki细胞）和人脐静脉内皮细胞中，从细胞生物学水平观察青蒿素衍生物（双氢青蒿素和青蒿琥酯）的抗侵袭和抗血管形成作用，并通过分子生物学和蛋白质组学方法探讨分子机制，为将这类有自主知识产权的药物用于CIN和子宫颈癌的治疗提供依据。

新生血管形成"开关"的触发是子宫颈上皮内瘤变（CIN）进展和子宫颈癌发生过程中的关键事件，抗肿瘤血管形成已经成为新的治疗策略之一，但目前在CIN和子宫颈早期浸润癌中还缺乏有效方法来确定病变的血管形成表型，抗血管形成制剂也多被国外垄断。. 本研究的第一部分利用三维能量彩色多普勒超声技术和造影超声技术检测CIN和早期子宫颈癌患者病灶的血管分布及血流，并用血管形成标记分子对切除的宫颈组织进行免疫组化染色评价微血管密度，以确定何种指标或方法更能准确判断CIN和早期子宫颈浸润癌的血管形成活性，目的是抗血管形成治疗筛选目标患者。结果发现，除了传统的CD34和VEGF等血管形成标志物外，血小板反应素TSP-1和神经触突导向分子Netrin-4表达的下降也存在于CIN和早期宫颈癌中。遗憾的是，没有发现后两种血管形成标记物的检查及三维能量多普勒超声及造影超声技术的结果与患者病情和转归之间又明确关系，因此用作判断患者血管形成表型的可行性差，需要从另外的角度进行研究。.第二部分是在体外培养的子宫颈癌细胞系（Hela和CaSki细胞）和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中，从细胞生物学水平观察青蒿素衍生物（双氢青蒿素和青蒿琥酯）的抗侵袭和抗血管形成作用，并通过分子生物学和蛋白质组学方法探讨分子机制，为将这类有自主知识产权的药物用于CIN和子宫颈癌的治疗提供依据。与第一部研究相反，该部分研究获得了很多有意义的结果。结果发现青蒿素衍生物能够抑制宫颈癌细胞系Hela和CaSki的体外增殖、并诱导其凋亡，对这两种癌细胞的侵袭能力有抑制作用。进一步的研究发现，青蒿素衍生物能够调节癌细胞有丝分裂原激活的蛋白激酶MAPKs家族和聚焦粘附激酶（FAK）的磷酸化水平，并诱导癌细胞表达基质金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP-1）的表达；这些发现一定程度上解释了青蒿素衍生物的抗宫颈癌侵袭作用。.同时还发现，青蒿素衍生物尤其是双氢青蒿素能抑制HUVEC的体外增殖，在体外血管形成模型和体内血管形成模型中均观察到了双氢青蒿素的抗血管形成作用。进一步的研究发现，尽管发现在蛋白和mRNA水平双氢青蒿素不能抑制Hela和CaSki细胞血管内皮生长因子VEGF 的表达，但双氢青蒿素能诱导宫颈癌细胞TSP-1 的mRNA的表达，并降调人HUVEC中VEGF受体-2的表达水平。这部分解释了青蒿素衍生物的抗血管形成作用。