骨髓增生异常综合征向白血病转化特异性microRNA的筛选及鉴定

我们基于已经建立的435例MDS患者巢式病例对照研究队列（发生转白的患者为病例组，未转白的患者为对照组），结合了临床流行病学与分子生物学研究方法，采用microRNA表达谱芯片初步筛选出了由20个差异microRNA组成的子集，可将病例组和对照组明显区分开。为了提高芯片筛选的有效性，本研究拟扩大microRNA芯片检测的样本量（病例组和对照组各增加7例患者标本），并结合芯片自身对照和转白危险因素配对的芯片病例对照研究，筛选出MDS转白的特异性microRNA。基于上述MDS患者队列，我们对队列中病例组和对照组患者上述MDS转白特异性microRNA的表达水平进行real-time PCR验证，并结合MDS转白相关的临床指标，采用Cox多因素方法对筛选出的特异性microRNA进行预后分析，最终确定MDS转白的特异性microRNA，所得结论为找到早期预测MDS转白的分子标志物提供理论依据。

我们基于课题组已经建立的MDS患者巢式病例对照研究队列，采用临床流行病学与分子生物学相结合的研究方法，采用microRNA表达谱芯片初步筛选出了由20个差异microRNA组成的子集，进一步的生物信息学分析最终筛选出7个MDS转白特异性microRNA，依次为hsa-miR-345，hsa-miR-1826，hsa-miR-342-5p，hsa-miR-1290，hsa-miR-1246，hsa-miR-150和hsa-miR-574-5p，其中hsa-miR-345，hsa-miR-1826，hsa-miR-342-5p和hsa-miR-1290在病例组患者中下调，hsa-miR-1246，hsa-miR-150和hsa-miR-574-5p在病例组患者中上调。基于上述已建立的MDS患者队列，在病例组和对照组余下的患者中（除外已行芯片检测的患者），按照病例：对照=1：1的配对原则，从符合配对条件（包括年龄、性别、IPSS分组、转白时间等配对条件）的患者中，随机抽出11例患者，对上述MDS转白特异性microRNA的表达水平进行了real-time PCR验证，结果与microRNA表达谱芯片结果一致。我们进一步采用 targetscan 5.1软件对上述7个microRNA进行靶基因预测，我们发现SLC7A5基因（本课题组前期筛选出的6条MDS转白相关基因之一）是7个差异microRNA共同的靶基因。SLC7A5基因，编码氨基酸转运蛋白LAT1，参与必需氨基酸的转运。已有的研究表明，LAT1在许多人类原发肿瘤中高表达，考虑可能的原因是由于肿瘤细胞对于营养的需求持续增高所致。我们采用siRNA方法在MDS转白细胞株SKM-1细胞株中对SLC7A5基因进行了相关研究。结果发现，特异性的沉默SLC7A5基因后，SKM-1细胞系增殖能力明显受到抑制，细胞活力较阴性对照组显著降低，并可以促使SKM-1细胞从早期凋亡进入晚期凋亡和死亡。这提示SLC7A5基因被特异性的沉默或过表达后，SKM-1细胞的恶性增殖能力明显降低，表明SLC7A5基因可能通过影响MDS恶性克隆的增殖途径在MDS转白过程中起作用。我们需进一步研究SLC7A5基因的关键调节microRNA，并明确MDS转白特异性的microRNA，所得结论为找到早期预测MDS转白的分子标志物提供理论依据。