PAEs经Kisspeptin/GPR54系统致雌性性早熟的作用机制

近年流行病学调查资料表明，环境内分泌干扰物邻苯二甲酸酯(PAEs)可导致女童性早熟。Kisspeptin/GPR54系统是调控GnRH释放、影响青春期启动的关键，但尚不清楚PAEs经该系统致雌性性早熟的机制。本课题拟采用下丘脑GnRH细胞GTl-7为体外模型，研究PAEs对GnRH细胞中Kisspeptin/GPR54系统的作用；采用青春前期大鼠下丘脑离体培养模型，研究PAEs协同Kisspeptin促进GnRH的释放，并应用受体拮抗剂反向证明ERα和GPR54在此效应中的介导作用；采用雌性大鼠动物模型，研究新生期和青春前期PAEs暴露对青春期启动时间和排卵周期的干扰、PAEs通过影响雌激素正负反馈干扰Kisspeptin/GPR54系统促进GnRH的释放。本研究旨在阐明PAEs经Kisspeptin/GPR54系统促进GnRH释放的机制，这对于评价PAEs与女童性早熟的关系具有重要意义。

近年流行病学调查资料表明，环境内分泌干扰物邻苯二甲酸酯(PAEs)可导致女童性早熟。Kisspeptin/GPR54系统是影响青春期启动的关键，但尚不清楚PAEs经该系统致雌性性早熟的机制。本项目科学假说为邻苯二甲酸酯类化学物可以干扰Kisspeptin/GPR54系统导致GnRH的释放增加，从而影响雌性青春期的启动时间。本项目首先用动物实验证明新生期或青春前期DBP暴露能显著提前雌性大鼠青春期启动时间。这种效应只影响下丘脑神经递质的传递，而没有对生殖系统如卵巢产生毒性。其次，我们分析了kisspeptin、GPR54、ERα、ERβ mRNA在下丘脑AVPV和ARC区的表达，并对对kisspeptin在AVPV和ARC中表达做了免疫组化分析。实验结果发现DBP暴露对AVPV和ARC亚区中Kisspeptin/GPR54系统关键蛋白的调控不同。其中，ARC区中GPR54表达的下调可能是DBP引起性成熟提前的关键。对神经系统特别是下丘脑而言，与新生期相比，青春前期是另一个比较重要的暴露关键期。新生期DBP暴露后，在个体成长的过程中，有发育补偿的过程，而青春前期暴露因为缺少这样的补偿过程，对个体带来的损害更大。最后，为进一步探讨GPR54在PAEs干扰GnRH释放中的介导作用，我们进行了青春期SD雌性大鼠下丘脑体外培养，观察在经过DEHP/DBP或其代谢产物MEHP/MBP暴露后GnRH的表达。实验结果发现DBP/DEHP对下丘脑GnRH表达的影响主要是通过其本身而非其主要代谢产物MBP/MEHP的作用。DBP/DEHP通过GPR54干扰GnRH mRNA合成。经过对本项目的研究，我们顺利建立新生期和青春前期PAEs染毒动物模型、进行了下丘脑组织离体培养试验，有力地证明了低浓度DBP/DEHP在新生期或青春前期这两个关键期暴露能将雌性大鼠青春期提前，并证实kisspeptin/GPR54系统在这一事件中的关键作用。为分析PAEs等内分泌干扰物暴露影响雌性青春期启动时间提供有力线索。.我们的实验结果已发表SCI文章1篇（Toxicology，IF=4.0），修回文章1篇，待投文章2篇。参加国际会议2次（2012国际内分泌学年会，2014年毒理学年会），发表会议摘要3篇，制作展报3张。联合培养已毕业博士研究生1名，培养已毕业硕士研究生1名，在读硕士研究生3名。