Anxa3,Anxa5,Anxa11调控肿瘤细胞淋巴道转移力/预警肿瘤转移及其共相关蛋白研究

恶性肿瘤转移的早期淋巴道转移发生机制不清,是肿瘤学难题。Annexins参与细胞多种生理活动，正成为肿瘤发生和进展研究热点分子，但其与淋巴道转移的关系尚不明确。本组前期发现Annexins中的Anxa3,Anxa5和Anxa11在高淋巴道转移力肿瘤细胞株中表达均明显上调，本项目拟1)通过调控Anxa5和Anxa11在肿瘤高低淋巴道转移力Hca-F和Hca-P细胞中的蛋白表达水平,考察该变化对肿瘤细胞体内外黏附、侵袭、迁移及转移潜能的影响；2)检测和定量比较Anxa3,Anxa5和Anxa11在肿瘤患者标本/血液及癌旁组织/健康人血液中的分布及水平,完成三者作为肿瘤转移预警标志物的探讨;3)筛选Anxa3,Anxa5和Anxa11基因转染前后细胞中差异表达蛋白,重点关注三者共同相关的蛋白。阐述三者对肿瘤淋巴道转移的作用机制,获得肿瘤淋巴道转移关键蛋白,为肿瘤淋巴道转移早期诊治提供新靶点分子。

淋巴道转移是上皮来源恶性肿瘤细胞早期主要转移方式，致患者死亡率高、预后差。淋巴道转移发生机制不清，一直是肿瘤学研究难题之一。Annexins参与细胞多种生理活动，成为肿瘤发生和进展研究热点分子，其与淋巴道转移关系尚不明确。本组前期结果表明Anxa3, Anxa5和Anxa11在一对遗传背景相似，淋巴道转移力不同鼠肝癌Hca-F和Hca-P细胞株中差异表达显著，是潜在影响肿瘤淋巴道转移的关键分子。本课题研究表明：1）ANXA3的下调促进Hca-F体外增殖、迁移和侵袭能力，主要通过激活Erk通路和PI3K/Akt通路实现；ANXA3的下调促进Hca-P体外增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力，相反，ANXA3的过表达抑制Hca-P细胞体外增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力，主要通过调节Erk和JNK通路实现；ANXA3下调通过内源性凋亡途径增强Hca-P细胞对顺铂的耐药性；2）ANXA5下调抑制Hca-F体外迁移和侵袭能力、体内外淋巴结转移和黏附能力，ANXA5下调通过抑制ERK/c-jun抑制p-c-jun(Ser73)起增殖抑制能力，ANXA5下调抑制ERK促E-cadherin表达而降低Hca-F细胞迁移和侵袭能力；ANXA5表达上调导致Hca-P体积增大，线粒体肿胀，线粒体内嵴减少，基质密度降低；ANXA5上调促进Hca-P增殖、迁移和侵袭能力；ANXA5的表达与肿瘤表观恶性程度相关，与肿瘤大小无关；ANXA5表达量增加促Hca-P淋巴结转移; 3) ANXA11下调促进Hca-P细胞的体外迁移、侵袭、淋巴结粘附能力和体内淋巴结转移力，增强Hca-P对5-FU耐药性；ANXA11下调则抑制Hca-F相应恶性表型; 4) 三种蛋白水平变化均影响肿瘤细胞的体外恶性表型和体内成瘤性、恶性程度和淋巴结转移；5）WB初步结果表明三种蛋白在临床病人组织(肝癌、胃癌和肾癌)中阳性检出率和水平升高明显，ELISA实验表明血液中三者水平升高，但差异不显著；6）蛋白质组学、qRT-PCR和WB初步结果表明Anxa3、Anxa5和Anxa11在肝癌中通过调控ERK、PI3-AKT和c-Jun通路相关分子，尤其共调控ERK和或c-Jun相关分子调控其恶性表型。Anxa3、Anxa5和Anxa11为转移关键分子,通过共调控ERK/c-Jun相关分子起作用，可作为肿瘤淋巴道转移早期诊治的潜在靶分子。