肿瘤转移相关蛋白3（MTA3）对食管-胃交界腺癌淋巴道转移的调控机制

食管-胃交界腺癌(贲门癌)区域淋巴结转移的调控机制一直未能阐明。申请人在之前的工作中采用免疫组化从统计学层面观察到贲门癌中VEGF-C的高表达与淋巴管生成和淋巴结转移成正相关,而MTA3的表达与上皮-间质细胞转换（EMT），VEGF-C的表达负相关。因此我们课题组提出MTA3是VEGF-C和EMT的上游调控基因，可能通过不同调控机制调节贲门癌的淋巴道转移的假说。本课题拟以食管-胃交界癌细胞系为研究对象：①通过转染MTA3基因建立MTA3过表达细胞离体模型，在蛋白、mRNA等水平探讨MTA3对E-cadherin，Snail，VEGF-C等基因的调控作用；②利用生物发光技术建立可视化动物移植模型，从整体观察MTA3对肿瘤转移的影响；③利用mRNA差异显示技术，寻找MTA3调控淋巴道转移的其他可能机制。

淋巴道转移是食管-胃交界癌治疗失败的主要原因,肿瘤转移相关基因（Metastasis-associated genes, MTA）家族可通过调节雌激素通路、细胞骨架和细胞凋亡等途径促进肿瘤的侵袭和转移。MTA3作为MTA家族的新成员，也被证实可通过调控EMT环节影响肿瘤的转移。我们团队应用免疫组化对不同病理分期食管癌手术标本进行检测分析，我们发现和早期癌组织相比，有转移的标本中MTA3蛋白表达水平明显降低。免疫组化进一步表明MTA3表达与Snail呈负相关，和E-cadherin呈正相关。当我们利用食管-胃交界癌进行研究时，进一步发现MTA3可能通过抑制Snail的表达而上调E-cadherin的表达，所以对食管-胃交界癌的EMT过程有明显的抑制作用。因此我们课题组在前期工作的基础上提出MTA3可能是调控食管-胃交界癌淋巴道转移的主导基因的假说。因未能自行建立贲门腺癌细胞系，课题组购买了与食管-胃交界癌相邻近的胃腺癌细胞系SGC7901开展实验研究。通过转染MTA3基因分别建立MTA3过表达和抑制表达胃腺癌细胞离体模型，在蛋白质、mRNA水平探讨MTA3对E-cadherin，Snail等基因的调控作用。在MTA3过表达细胞系中，细胞中Snail基因的表达在RNA和蛋白质水平都有明显下降，E-cadherin的表达在RNA和蛋白质水平均有明显上升，说明MTA3的表达与Snail呈负相关，而与E-cadherin呈正相关。在MTA3抑制表达细胞系中，细胞中Snail基因的表达在RNA和蛋白质水平都有明显上升，E-cadherin的表达在RNA和蛋白质水平均有明显下降，从另一个侧面证明MTA3对Snail与 E-cadherin的调控关系。通过绘制细胞生长曲线及transwell实验，发现MTA3过表达明显抑制细胞增殖速度和侵袭能力，MTA3 抑制表达后细胞系增殖速度和侵袭能力明显提高。实验结果表明MTA3对胃腺癌细胞生长有抑制作用，同时MTA3对Snail和E-cadherin表达的调控说明MTA3可通过抑制上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition, EMT）途径而抑制肿瘤转移。研究结果证明了MTA3对胃腺癌的诊断、预后判断和治疗的潜在价值。