分离与鉴定小麦几丁质酶基因和葡聚糖酶基因及表达模式

以噬菌体Gem-12为载体构建小麦基因库。利用简并引物经PCR扩增几丁质酶基因和葡聚糖酶基因和葡聚糖酶基因片段，序列测定后用作筛选基因库的探针。经三轮筛选，选择14个阳性几丁质酶基因克隆，23个葡聚糖酶基因克隆。各选其中一个进行核酸序列测定。结果表明几丁质酶基因和葡聚糖酶基因分别含有317和335个氨基酸，它们都没有内含子，在小麦基因组中有5-6个拷贝。Northern杂交分析表明，受秆锈菌侵染诱导几丁质酶基因仅在抗病等基因系中高效表达，而在感病系中则未检测到。赤霉菌侵染也诱导几丁质酶基因表达。抑菌测定分析表明，来自曲霉菌的抗真菌蛋白对赤霉菌孢子及菌丝的抑菌作用最强。分离鉴定的抗真菌基因均与植物表达载体构成嵌合基因，并制备各抗真菌蛋白的特异抗体。