猪呼吸道纤毛细胞对猪肺炎支原体强弱毒株感染应答的差异蛋白质组学研究

猪肺炎支原体引起的猪支原体肺炎危害严重,致病机制研究对防控该病具有重要意义。本研究拟应用双向荧光差异凝胶电泳（2-D DIGE）和质谱（MS）等蛋白质组学技术有效分离和鉴定猪呼吸道纤毛细胞应答猪肺炎支原体强、弱毒株感染的差异表达蛋白；然后，利用生物信息学技术根据已知基因组序列和相关数据库资源对上述差异表达蛋白的功能信息，编码基因信息以及其相关胞内信号通路等信息进行解析注释，建立差异表达蛋白谱；之后，再应用PCR、Western Blotting、免疫荧光等技术，从体外、体内进一步分析和验证猪肺炎支原体强弱毒株感染导致宿主细胞或机体差异表达的关键蛋白；最后，综合分析引起差异表达的原因，阐明Mhp强弱毒株致病性差异的分子机制，探讨猪肺炎支原体感染与猪呼吸道纤毛细胞应答之间发生的相互作用关系，为猪支原体肺炎的防控提供新手段。

猪肺炎支原体引起的猪支原体肺炎危害严重，致病机制研究对防控该病具有重要意义。本研究首先通过检测NO和过氧化氢建立了猪肺炎支原体强、弱毒株感染猪气管上皮细胞模型，通过临床症状和肺病变检测建立了感染猪发病模型；然后，采用双向凝胶电泳（2D）、同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ 技术)和质谱（MS）等蛋白质组学技术有效分离和鉴定猪呼吸道纤毛细胞应答猪肺炎支原体强、弱毒株感染的差异表达蛋白；利用生物信息学技术根据已知基因组序列和相关数据库资源对上述差异表达蛋白的功能信息，编码基因信息以及其相关胞内信号通路等信息进行解析注释，建立差异表达蛋白谱；之后，再应用Western Blotting等技术，从体外、体内进一步分析和验证猪肺炎支原体强弱毒株感染导致宿主细胞或机体差异表达的关键蛋白；最后，综合分析引起差异表达的原因，阐明猪肺炎支原体强弱毒株致病性差异的分子机制，探讨猪肺炎支原体感染与猪呼吸道纤毛细胞应答之间发生的相互作用关系，为猪支原体肺炎的防控提供新手段。