高迁移率族蛋白B1介导调节性T细胞免疫功能的信号转导机制

高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是一种新发现的晚期炎症介质，它对调节性T细胞(Treg)免疫功能具有重要调节作用，但其确切信号转导机制尚不清楚。信号转导及转录活化因子-3(STAT3)在HMGB1致炎作用的信号调控及Treg免疫功能发挥过程中均具重要作用，因此推测其可能参与了HMGB1 介导Treg免疫功能的过程。本项目拟采用流式细胞分析术、Western blot、EMSA、RNAi技术以及定量PCR等方法，从整体、细胞和分子水平观察HMGB1对Treg免疫功能及STAT3信号通路活化的影响；并利用STAT3抗体及shRNA质粒在体内/外抑制STAT3活化和基因表达，分析HMGB1对Treg免疫功能影响的变化及其与STAT3信号通路活化状态的内在联系。该研究将从全新的角度进一步认识STAT3信号通路在HMGB1介导Treg免疫功能中的地位与调节机制，为探索脓毒症的免疫调控途径提供新思路。

HMGB1是一种新发现的晚期炎症介质和重要免疫调节因子，对创、烧伤脓毒症的发生与发展具有重要影响。目前有关HMGB1免疫调控效应的信号转导机制缺乏深入了解。本项目围绕STAT3信号通路角度，从整体、细胞和分子水平上探讨HMGB1作为重要免疫调节因子对CD4+CD25+Treg免疫功能的影响及其信号调控机制。主要研究结果为：⑴ 分离培养正常小鼠脾脏CD4+CD25+Treg，给予重组HMGB1刺激后，检测到Treg免疫功能受到抑制，其表面总STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白和基因表达水平及STAT3 DNA结合活性均出现降低，初步明确了HMGB1调节Treg免疫功能可能涉及到STAT3通路的激活。在此基础上应用STAT3特异性抗体拮抗STAT3通路的活化，并构建STAT3-短发夹RNA(shRNA)质粒，将质粒转染至Treg后下调STAT3基因表达，观察到抑制STAT3通路活化后HMGB1对Treg免疫功能的负影响减弱。通过上述实验，从正反两方面论证HMGB1介导Treg免疫调节功能与STAT3信号通路具有本质联系。⑵ 利用小鼠动物模型，给予体内注射重组HMGB1刺激后，检测到CD4+CD25+Treg免疫功能及其细胞表面STAT3通路活化水平均受到抑制；应用特异性STAT3抗体和STAT3-shRNA质粒拮抗STAT3通路活化并抑制STAT3基因表达，观察到STAT3通路受到抑制后，HMGB1对Treg免疫功能的抑制作用明显减弱，进一步明确了STAT3通路在HMGB1介导Treg免疫调节过程中具有重要作用及意义。HMGB1对Treg功能状态及凋亡的影响及相关机制尚需进一步深入研究。