多环芳烃对菲律宾蛤仔DNA损伤分子机制的研究

本项目首先从菲律宾蛤仔芳烃受体蛋白的鉴定入手，采用抑制性消减杂交技术，构建菲律宾蛤仔在PAHs胁迫下cDNA消减文库，筛选、鉴定与解毒功能相关的差异表达基因，查明解毒代谢酶基因表达的调控机制，探究解毒代谢酶所介导的不同类型DNA损伤效应，阐明PAHs对菲律宾蛤仔DNA损伤的介导途径和作用机制，建立解毒代谢酶基因表达与DNA损伤效应的关系，全面解析PAHs对菲律宾蛤仔DNA损伤的分子机制，为我国近海PAHs污染监测提供技术支撑，这对于海洋贝类的健康养殖、资源保护和食品安全具有重要意义。

本项目采用RT-PCR、RACE和抑制性消减杂交技术，克隆了菲律宾蛤仔芳烃受体基因（AhR）、解毒代谢酶基因（CYP4、GST）全序列和芳烃受体核转位蛋白（ARNT）、热休克蛋白基因（HSP90）、P-糖蛋白（P-gp）基因部分序列，分别构建了在水温12℃、22℃下菲律宾蛤仔对BaP胁迫的cDNA消减文库，筛选、鉴定已知功能基因41种，假定蛋白16种，未知蛋白2种，所得差异表达基因主要与转录后修饰、蛋白翻译、细胞信号转导、解毒代谢和免疫等功能相关，其中Myc 同源基因、含硫代酸酯蛋白和丝氨酸蛋白酶为不受季节（温度）影响的差异基因。利用实时定量PCR技术检测了菲律宾蛤仔在BaP胁迫下鳃解毒代谢基因（AhR、ARNT、HSP90、CYP4、GST）和差异表达基因的mRNA表达情况，这些解毒代谢基因和12种差异表达基因（ARNT、CYP4、GST C、GSTpi、Mn-SOD、se-GPx、CAT、HSP 40A、Defensin、Serine protease、Thioester protein、C-lectin）均受到BaP胁迫不同程度的诱导。通过研究菲律宾蛤仔在BaP胁迫下鳃和消化盲囊的损伤效应，建立了DNA、蛋白质、脂质损伤与解毒代谢基因表达在时间、剂量上的对应关系，解析了菲律宾蛤仔对BaP胁迫可通过一系列的介导途径诱导或抑制某些特定基因的转录，改变不同解毒代谢酶或相关蛋白的活性，从而导致不同类型和程度的DNA损伤，阐明了多环芳烃（PAHs）对菲律宾蛤仔DNA损伤的分子机制。. 项目培养博士研究生2名、硕士研究生1名，发表学术论文共10篇，其中SCI收录论文7篇。