静脉麻醉药依托咪酯抗脓毒症条件下肾上腺损伤机制研究

脓毒症的病死率约与心肌梗塞相当，其救治过程中常试用静脉麻醉药。依托咪酯在该类药物中对循环和呼吸影响最小，但其对脓毒症的应用颇有争议，因为依托咪酯被报道可减少皮质醇合成进而影响机体抗病能力。本组前期研究发现依托咪酯预处理可以通过减少caspas3,8,9等凋亡相关蛋白、开放mKATP、减少自由基合成而减轻肾上腺皮质细胞损伤，显然这与已知依托咪酯抑制肾上腺功能似有矛盾。本课题将试用依托咪酯预处理脓毒症大鼠，采用液相芯片、免疫荧光、蛋白免疫印迹等方法综合评价预处理大鼠在脓毒症条件下丘脑-垂体-肾上腺轴的具体变化，并探讨其与糖皮质激素合成信号转导通路NFκB-IP3/PLC/Ca2+-PKA/cAMP和/或客观上另外具有的直接抗肾上腺损伤作用的相关性，进而了解依托咪酯可以维持抗炎/促炎平衡的最佳给药方式。此研究对扩展脓毒症临床治疗新思路具有重要意义，有望为脓毒症中恰当应用静脉麻醉药物奠定重要基础。

本课题组在前期研究基础上分别从动物模型和体外细胞模型继续深入研究了依托咪酯对脓毒症条件下肾上腺损伤的机制。在动物模型方面，本课题组已证实预先给予低剂量依托咪酯能够减轻接下来持续输注依托咪酯所带来的肾上腺损伤，这一机制与依托咪酯影响了ERK/MAPK信号转导通路有关。但是，依托咪酯和脓毒症引起的炎症都会抑制肾上腺功能，故本课题组利用盲肠结扎穿孔(CLP)术复制大鼠脓毒症模型，于CLP术后不同时间间隔注射依托咪酯，发现给药时机对脓毒症大鼠生存率有较为显著的影响，该影响主要是与依托咪酯抑制NF-κB激活有关，与依托咪酯导致的肾上腺功能损伤无明显相关性。以上结果已发表。本课题组同时着眼于糖皮质激素受体信号通路，利用实时荧光定量PCR检测肾上腺中糖皮质激素受体（GR）、糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白（GILZ）和丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1（MKP-1）mRNA，发现依托咪酯不仅抑制糖皮质激素合成，还抑制GR的表达，从而抑制了NF-κB激活。但是，通过观察脓毒症大鼠脾脏的淋巴细胞凋亡水平，发现依托咪酯加剧脓毒症期间淋巴细胞的凋亡，这可能是导致脓毒症预后不佳的一个主要原因。该结果已待发表。另外，本小组还观察了依托咪酯和丙泊酚分别和联合应用于脓毒症大鼠对肾上腺中糖皮质激素受体的影响，结果显示依托咪酯能上调GR的表达，而异丙酚对GR的影响小于依托咪酯，但对炎症因子的抑制作用大于依托咪酯，故对于脓毒症期间麻醉药物的选择提供了一定实验证据。其分子机制有待进一步研究。在垂体-下丘脑分泌轴上，垂体腺苷环化酶激活肽(PACAP)起着重要的调节作用，能逆转炎症导致的淋巴细胞凋亡。故本课题组尝试对脓毒症大鼠应用PACAP，发现PACAP能减轻脓毒症带来的肾上腺损伤，包括降低肾上腺细胞凋亡和降低外周淋巴细胞分泌IFN-γ，这可能给脓毒症治疗带来新的启示，该结果也已待发表。在细胞水平上，本课题组已证实依托咪酯预处理可减轻依托咪酯诱导大鼠肾上腺皮质细胞毒性作用。故继续利用脂多糖(LPS)刺激大鼠腹腔原代巨噬细胞模拟体外细胞脓毒症模型，发现低于治疗剂量的依托咪酯能够抑制脂多糖刺激下地巨噬细胞TNF-α和IL-6合成减少，具有一定的抗炎作用，其作用机制发现可能是与抑制巨噬细胞CD-14和TREM-1的表达及NF-κB的激活有关。该结果已发表