可溶性环氧化物水解酶抑制剂抗缺血性心律失常的机制探讨

可溶性环氧化物水解酶抑制剂(sEHi)阻止细胞内环氧二十碳三烯酸(EETs)的迅速降解，从而增强EETs的强大生物活性,其对心血管系统的重要保护作用备受关注。本研究组前期工作发现sEHi制剂tAUCB具有抗缺血性心律失常的作用,并且观察到使用tAUCB使小鼠心梗后缺血区心肌的微小RNA(miRNA)发生了显著变化，并且其中4个miRNA的靶基因包括重要的心脏离子通道和/或缝隙连接蛋白基因。由此设想miRNA参与tAUCB抗缺血性心律失常作用。为此本研究首先筛选并鉴定与tAUCB抗缺血性心律失常作用相关的miRNA，接着预测并验证相关miRNA的靶基因以阐明其作用机制,再深入探讨tAUCB调节miRNA的途径,以阐明tAUCB通过激活PI3K/Akt信号通路和血清应答因子(SRF)调控miRNA达到抗缺血性心律失常的作用。本研究结果将开拓对sEHi认识,并为临床缺血性心律失常的防治提供新思路

缺血性心脏病是诱发室速和室颤等恶性心律失常而导致心源性猝死的主要原因，发现新的抗心律失常药物作用靶点是目前心律失常领域的研究难点和热点。可溶性环氧化物水解酶抑制剂(sEHi)阻止细胞内环氧二十碳三烯酸(EETs)的迅速降解，从而增强EETs的强大生物活性。本研究组发现sEHi制剂t-AUCB对心肌梗死后的小鼠发生的缺血性心律失常有明显抑制作用，因此首先筛选出并证实了与sEHi抗缺血性心律失常作用密切相关的4个miRNA是miR-1, 133, 29, 7f。.体内、外研究发现t-AUCB能够浓度依赖性地降低缺血心肌中的miR-1水平，并升高miR-1的靶基因KCNJ2、GJA1 mRNA及所编码的Kir2.1、Cx43蛋白的表达和IK1电流的密度。t-AUCB能够拮抗miR-1过表达试剂agomir miR-1的作用。.体内实验发现t-AUCB浓度依赖性地使SRF mRNA表达降低，而 SRF蛋白表达增高，t-AUCB能够拮抗agomir miR-1所致miR-1升高、SRF蛋白水平下的作用。通过构建SRF siRNA转染乳小鼠心肌细胞，发现沉默SRF后能逆转t-AUCB的作用。因此证实t-AUCB可能部分通过调节转录因子SRF的水平，进而影响miR-1的表达来达到抗缺血性心律失常的作用。.体内、外实验发现t-AUCB能够浓度依赖性地增加心梗后缺血心肌中p-AKT、p-GSK3β表达水平。t-AUCB能够拮抗agomir miRNA-1的作用。使用PI3K抑制剂wortmannin、Gsk3β抑制剂能逆转t-AUCB的影响。证实t-AUCB通过PI3K-Akt-Gsk3β通路调控miR-1及上调miR-1的靶基因GJA1、KCNJ2。.尾静脉注射wortmannin后再建立心梗模型，检测到wortmannin对 t-AUCB对SRF蛋白的上调作用无影响，提示虽然SRF和PI3K都参与t-AUCB对miR-1的调控，使用PI3K抑制剂wortmannin干预后并不能影响t-AUCB上调SRF，说明在t-AUCB对miR-1的调节中SRF位于PI3K通路的上游，PI3K通路可能不直接参与t-AUCB对SRF蛋白的上调作用。SRF、PI3K-Akt-Gsk3β通路与miR-1之间存在着复杂的反馈调节机制。.本研究开拓了对sEHi的认识，为心源性猝死的预防和治疗提供新的思路