miR-17-92簇在慢性粒细胞白细胞发病中的作用及机制研究

我们前期研究发现miR-17-92在CMLCD34+细胞中高表达，并且与BCR-ABL 激酶活性、S1P1和SIRT1具有相关性，提示microRNA-17-92可能是参与CML发病的重要调控分子。本研究将比较CML干祖细胞亚群中microRNA-17-92的表达差别；利用慢病毒介导的microRNA沉默策略，确定microRNA-17-92对CML细胞增殖、分化、凋亡及静息等生物学特性的影响；确定高表达microRNA-17-92对正常造血干细胞恶性转化的作用；确定miR-17-92调节CML细胞生物学特性的靶基因，阐明其调控机制；建立bcr-abl基因转移白细胞小鼠模型，阐明沉默microRNA-17-92对BCR-ABL诱导白血病发病的阻断作用。该课题将阐明microRNA-17-92调控CML发病的作用与机制，为靶向CML干细胞治疗提供新的靶点。

miR-17-92 是与肿瘤发生发展密切相关的miRNA簇，前期miRNA 表达谱显示其在CML CD34+细胞中高表达。但是，miR-17-92 如何参与CML 发病并不清楚。本项目主要研究了miR-17-92在CML干祖细胞中的表达及调控；高表达miR-17-92对正常造血干细胞的转化作用；利用miR-17-92敲除小鼠以及BCR-ABL诱导白血病发病模型，确定了miR-17-92对CML发病中的作用及机制。主要进展和发现包括：（1） 确定了miR-17-92在CML CD34+ 细胞上表达及调控。16例病人标本的结果分析确证CML患者骨髓CD34+ 细胞高表达miR-17-92。逆转录病毒介导bcr-abl基因表达提高造血细胞miR-17-92的水平。（2）观察了miR-17-92高表达对正常造血细胞生物学特性的影响。慢病毒介导miR-17-92高表达促进脐带血CD34+细胞增殖，抑制细胞凋亡，促进集落形成能力、抑制细胞向红系分化的趋势、增强细胞向粒系分化。（3）确定了miR-17-92对CML 细胞生物学特性的影响。miR-17-92可以促进K562细胞增殖，抑制其凋亡并调控细胞周期变化。利用细胞周期蛋白KSP的抑制剂SB743921也观察到类似生物学效应，包括细胞周期阻滞、抑制增殖和诱导细胞凋亡。（4）利用miR-17-92基因敲除的小鼠模型评价了miR-17-92对正常造血细胞分化的影响。发现miR-17-92基因敲除对正常红系和粒系分化影响不大。（5）利用上述模型，结合bcr-abl 诱导CML模型确定了miR-17-92基因簇在CML 发病中的作用。基因敲除miR-17-92延缓BCR-ABL诱导CML发病。（6）确定了TNFAIP3(A20) 是miR-17-92的新型靶基因。通过生物信息学分析及3’-UTR报告活性确定 A20 是miR-17-92的靶基因。并在CML标本中正证实了A20表达与bcr-abl活性相关，参与Imatinib抑制CML 细胞增殖的活性。（7）miR-17 介导低氧诱导骨髓MSC的血管生长因子分泌。上述研究进展系统阐明了miR-17-92基因簇在CML中的作用，为CML靶向治疗提供了新的靶点。本课题培养研究生4名，在Leukemia & Lymphoma 等杂志发表研究论文3篇，还有2篇SCI 论文待投稿。