单抗联合腺病毒疫苗对EBV感染人源化小鼠引起的淋巴瘤的治疗研究

The happening and development of lymphoma and several other kinds of tumor is closely related with EBV infection. Even though conventional treatment is effective to inhibit the growth of tumor, the relapse in 1-2 years is the main reason of death. Therefore, it is critical to find effective therapeutic strategy to prevent tumor recurrence. The good outcome in transfusion of in vitro activated EBV antigen specific T cell to EBV lymphoma patient indicating the great potential of EBV antigen specific immune therapy. However, the lack of good small animal model is a big challenge for the study of immune therapy for EBV lymphoma. Besides, How to raise effective immune response under partial immune deficient condition, which is normal among lymphoma patient, is another big problem. In our previous study, we infected certain strain of humanized mice with EBV, EBV positive lymphoma can be induced 2 month after infection and Adenovirus-EBV antigen peptides vaccine show certain therapeutic effect. Based on our previous work and the strong Co-stimulation function of LIGHT, We plan to use this model to study: 1)The therapeutic effect of Adeno-LIGHT-EBV antigen vaccine to EBV lymphoma. 2) Use anti-CD20 to decrease the tumor burden combined with Adeno-LIGHT-EBV antigen vaccine to raise antigen specific immune response, in order to prevent tumor relapse or completely cure the tumor, meanwhile study the machanism. This study will provide important information for the vaccine development and therapy innovation for EBV related tumor.

EBV感染与淋巴瘤等多种肿瘤的发生密切相关，常规治疗后1-2年肿瘤复发是主要致死原因，所以防止复发是治疗淋巴瘤的关键。体外活化的EBV抗原特异性T细胞的过继治疗效果显著，提示针对EBV抗原的免疫治疗颇具潜力。 然而由于缺乏小动物模型，EBV相关淋巴瘤的免疫治疗研究遇到很大障碍；另外，淋巴瘤的发生与免疫功能低下有关,如何在此情况下激发有效免疫反应也是个难题。本课题组前期工作中，用EBV感染人源化小鼠，感染后2个月形成淋巴瘤,且腺病毒-EBV 抗原肽疫苗对其有一定治疗作用。本项目拟利用该模型及LIGHT分子强共刺激作用的特点， 1）研究腺病毒-LIGHT-EBV抗原疫苗对淋巴瘤的治疗作用；2）采用抗CD20单克隆抗体降低肿瘤负荷同时联合腺病毒-LIGHT-EBV抗原疫苗的疗法，拟达到延缓复发或根治淋巴瘤的目的，并研究其作用机制。本研究将为疫苗研制和淋巴瘤的创新治疗提供重要的参考依据。

本项目拟利用EBV 感染的人源化小鼠淋巴瘤模型研究腺病毒-LIGHT-EBV 抗原疫苗及其联合抗 CD20 单克隆抗体对淋巴瘤的治疗作用及其作用机制。但是由于国内饲养环境和小鼠种属的原因，免疫缺陷小鼠繁殖困难，人源化小鼠模型的建立也随之受到影响。近几年来以共刺激分子的功能性抗体为代表的肿瘤免疫治疗取得了突飞猛进的进展，在肿瘤治疗中取得了出乎意料的治疗效果。项目执行期间我国对于肿瘤免疫治疗抗体药物的研究还处于相对落后的状态，所以项目负责人对研究内容做了相应的调整，调整为利用酵母展示技术开发PD-L1 的全人源抗体并研究其对肿瘤的治疗效果。PD-L1是肿瘤表达的一种免疫抑制因子，他通过作用于免疫细胞的PD-1受体介导抑制性信号。PD-L1的阻断性抗体可以阻断抑制性信号，恢复淋巴细胞的免疫反应，从而对肿瘤起到很好的治疗作用。主要研究内容包括：建立酵母展示全人抗体筛选平台，生产和鉴定抗原，筛选抗体，鉴定抗体的活性，在小鼠体内验证抗体的功能，抗体亲和力优化，和抗体成药性分析等。通过本项目的研究，建立了完善的酵母展示全人抗体筛选平台系统，并获得了针对PD-L1的阻断性全人抗体。该抗体的恒定区为突变型的IgG4亚型，瞬转蛋白产量在100ug/ml 左右，体外对于PD-L1、PD-1的结合具有良好的阻断作用；体外细胞活性实验系统证明该抗体可以增强T细胞免疫反应；体内小鼠肿瘤模型证实该抗体可以有效减缓肿瘤的生长；抗体具有较好的稳定性和较为理想的半衰期，具有很大的潜力可以开发成一个治疗性抗体药物。目前该抗体的开发过程已经整理发表SCI论文，临床前稳定细胞株开发正在进行，计划2年内申报临床试验。