云南多个少数民族儿童白血病NUDT15、TPMT基因型和巯嘌呤不耐受研究

The polymorphism of Thiopurine methyltransferase (TPMT) can not completely explain individual differences of mercaptopurine-related toxicity, because toxic effects still exist in a considerable number of patients with TPMT homozygous wild-type or normal especially in the Asian population.The research report of the United States and Japan in 2015 suggested that the genetic nucleoside diphosphate connection part X 15 gene variants (NUDT15) is assoiated with low mercaptopurine metabolism and leukopenia in childhood acute lymphoblastic leukemia (ALL) during maintenance treatment. We analyze the polymorphism of NUDT15 gene and TPMT gene through the sequencing method,By combining with clinical thiopurine-induced leukopenia, we evaluate whether the NUDT15 gene is more suitable than TPMT gene to predict the intolerance of mercaptopurine in Chinese ALL children. Yunnan is a multi-ethnic province, we will study Han children, and Yi, Hani, Bai, Dai, Zhuang children,which population is more than 1 million.We focus on polymorphism sequencing study of NUDT15 gene 1-3 exon and TPMT gene * 1, * 2, * 3A, * 3B, * 3C allele to analyze the polymorphisms as well as differences in expression among different ethnic health and ALL children, hoping to find the gene for prediction of bone marrow toxicity of mercaptopurine.

硫嘌呤甲基转移酶（TPMT）多态性不能完全解释巯嘌呤相关毒性的个体差异，因为相当数量的TPMT纯合野生型或正常的患者仍然有毒性反应，特别是在亚洲人群；2015年美国、日本研究报告提示，遗传性的核苷二磷酸连接部分X-15基因变异（NUDT15），与巯嘌呤低代谢和儿童急淋（ALL）维持治疗期白细胞减少症有关。因此，我们采用测序方法分析NUDT15基因多态性，并对应分析TPMT基因多态性;结合临床巯嘌呤引起的白细胞减少症，评估是否NUDT15基因更适合预测中国儿童ALL巯嘌呤治疗的不耐受性。云南为多民族省份，我们将除对汉族儿童研究外，还将对人口数超过100万的彝、哈尼、白、傣、壮5个民族健康儿童及ALL儿童进行NUDT15基因1-3号外显子及TPMT基因*1、*2、*3A、*3B、*3C等位基因多态性测序研究，分析其多态性在不同民族健康及ALL儿童中的表达差异，期望找到巯嘌呤骨髓毒性预测基因。

6-巯基嘌呤（6-MP）是儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）化疗的重要药物，特别是维持化疗期间的关键药物。欧美人群使用6-巯基嘌呤后骨髓抑制增强多与硫嘌呤甲基转移酶（TPMT）多态性有关，但是在亚洲人群中却不适用。2015年美国、日本研究报告提示，二磷酸核苷连接单元 X 型（NUDT15）多态性与亚洲人群巯嘌呤低代谢和儿童ALL维持治疗期白细胞减少症有关。但是在健康人群，尤其是多民族地区的资料很少。因此，我们测序分析了NUDT15和TPMT基因多态性在云南白族、彝族、傣族、壮族、哈尼族中健康儿童的分布情况及与儿童ALL维持化疗期间6-MP骨髓毒性的关系。结果提示少数民族健康儿童与白血病患儿的NUDT15和TPMT基因多态性类似，常见的TPMT 突变型检出率低，仅发现TPMT*3C 基因突变，少数民族健康儿童突变率为2.67%-7.28%，白血病患儿突变率 2.68%。但是TPMT预测6-MP引起的骨髓抑制敏感性低，不适合作为云南地区6-MP 不良反应预测基因，P=0.153。NUDT15 基因 1-3 号外显子中，都以Exon3的rs116855232突变类型最常见，少数民族健康儿童突变率为8.93%-24%，白血病患儿突变率26.68%。并且，仅NUDT15rs116855232与6-MP骨髓抑制有关，P = 0.008, OR = 2.743 (95% CI: 1.305– 5.768)。NUDT15 Exon3 rs116855232杂合子的6-MP耐受剂量为35.20±2.29 mg/m2，纯合子的6-MP耐受剂量为18.95±3.95 mg/m2，较野生型耐受剂量39.80±1.32 mg/m2明显降低。