内质网-微管相互作用分子机制的研究

The endoplasmic reticulum (ER) is an important organelle of the endomembrane system in eukaryotic cells. Morphologically, the ER can be divided into tubules and sheets and is highly dynamic. It has been shown that the formation of the ER network depends on microtubule. Microtubules not only provide mechanical support for the ER membranes, but also involve in the generation ER tubules by pulling the membranes. Depolymerization of microtubule is accompanied by the retraction of the tubular ER network. However, the molecular basis for the interactions between ER and microubule remains elusive. In this project, we aim to establish a SILAC-based proteomic approach to screen the components which are enriched in ER-microtubule contact sites, and identify candidates that are crucial for ER-microtubule interaction. We will then verify the cellular roles of the candidate proteins in the regulation of ER shaping and function. These results will provide new insight into ER morphology and functions.

内质网是构成真核细胞内膜系统的重要细胞器之一。在形态上，内质网可分为片状和管状两种不同的结构，并具有高度的动态性。已有的研究表明，内质网形态结构的发生和维持依赖与微管骨架密切相关。微管一方面可以为内质网网络结构维持提供骨架支撑作用，另一方面还可以介导管状内质网末端的沿微管运动，从而促进内质网形态的重构。微管被解聚后，内质网管状网络也会随之被破坏。然而内质网与微管相互作用的分子基础一直没有深入系统的研究。本研究拟利用SLIAC定量蛋白组学技术，通过比较微管聚合和解聚两种状态下内质网结合蛋白的变化，建立筛选内质网-微管相互作用蛋白的方法，鉴定新的介导内质网-微管相互作用的蛋白，并结合细胞生物学研究手段，验证候选蛋白在内质网结构与功能中的作用，初步阐明介导内质网-微管相互作用的分子机制。这些结果将为研究内质网膜形态发生和功能调节机制提供新的基础。

内质网是构成真核生物内膜系统的重要细胞器之一。在形态上，内质网可以分为片状和管状两种不同的结构，并具有高度的动态性。内质网形态和功能与微管等细胞骨架结构密切相关，但其作用机制还不清楚。本项目建立了基于SLIAC定量蛋白组学技术筛选内质网-微管相互作用的实验方法，利用APEX2-sec61β催化的生物素化修饰标记内质网结合蛋白，通过比较微管聚合和解聚两种状态下内质网结合蛋白的变化筛选差异蛋白，最终发现Rab7可能参与内质网-微管相互作用。此外，本项目还发现内质网跨膜蛋白FIT2可以介导内质网新型细胞骨架septin相互作用，其中FIT2蛋白N端loop与septin 7 G domain在相互作用中发挥了重要作用。在脂滴新生过程中，FIT2和septin与新生脂滴共定位，且细胞中敲低FIT2和septin 2影响了脂滴从内质网新生。该成果从新的角度阐释了内质网与细胞骨架相互作用的机制及生理意义。