血必净注射液肠道辐射防护效应及其作用机制研究

放射性肠炎是肿瘤放疗尤其是腹部和骨盆部肿瘤治疗的主要副作用，临床除了对症和支持治疗外，尚无理想治疗手段。肠道在受照后细胞凋亡，黏膜屏障受损，诱发炎症，严重可致死。在前期研究中，我们发现血必净注射液对肠道辐射损伤具有防护作用，能提高小鼠生存率，其作用机制国内外尚未见报道。本课题将利用前期建立的小鼠肠道辐射损伤模型，在整体水平进行血必净注射液肠道辐射损伤防护评价；在蛋白和基因水平，利用免疫组化、RT-PCR、Westernblot和ELISA等技术检测小肠细胞凋亡和炎症通路及相关因子变化，基本阐明血必净注射液在肠道辐射损伤防护中的作用机制，并确定其作用靶点；利用计算机辅助药物设计技术反向寻找血必净注射液的有效成分，探讨血必净注射液辐射防护的物质基础。研究结果将明确血必净注射液对肠道辐射损伤的防护作用，探讨其作用机制和物质基础，加深对肠道辐射损伤机制了解，为临床放射性肠炎的治疗提供新的实验依据。

放射性肠炎是肿瘤放疗尤其是腹部和骨盆部肿瘤治疗的主要副作用之一，肠道在受照后细胞凋亡，黏膜屏障受损，诱发炎症，严重可致死。现在临床除了对症和支持治疗外，尚无理想治疗手段，对放射性肠炎机制及治疗亟需深入研究。血必净注射液是临床上用于治疗呼吸系统和泌尿系统炎症及多器官功能障碍综合征等多种疾病的一种中药复方制剂，其在急性辐射损伤中的作用鲜有报道。本课题主要观察了血必净注射液对小鼠急性辐射损伤包括肠道和造血系统损伤的疗效，并对其作用机制进行了深入探讨。 对小鼠分别进行7.5Gy、8Gy、9Gy全身照射,腹腔注射血必净注射液。发现0.4ml/kg的血必净注射液可显著提高7.5Gy全身照射小鼠的生存率，并延长8,9Gy全身照射小鼠的平均生存时间。 对小鼠进行全身9Gy照射，持续给予腹腔注射0.4ml/kg的血必净注射液。分别在照射后第三天和第五天处死小鼠取材，观察小鼠肠道组织、蛋白以及细胞因子的变化。对小肠组织HE染色结果表明，辐射可引起小肠组织损伤，具体表现为小肠上皮细胞变性脱落，隐窝细胞有丝分裂减少，肠黏膜变薄，绒毛缩短，肠壁粘膜充血及炎症细胞浸润。而血必净治疗组则对小肠炎症有一定的缓和作用，表现为绒毛缩短减少，肠壁粘膜充血缓和。提取小肠隐窝与黏膜细胞的RNA，分析细胞因子的表达变化。结果发现辐射可引起小鼠黏膜细胞中IL-1α，IL-6，IL-10，caspase-1，TNF-α， TNF-β等所有检测指标的降低，而血必净治疗组则能小幅降低黏膜细胞中的细胞因子水平。对小鼠隐窝细胞进行检测，发现辐射可提高IL-1α，IL-6，IL-10水平，降低caspase-1，TNF-β水平，血必净治疗组可降低辐射引起的IL-1α，IL-6的表达，增加TNF-α表达。对小鼠进行全身2Gy照射，持续给予腹腔注射0.4ml/kg的血必净注射液7天，在第9天处死小鼠取材。发现血必净注射液可显著提高受照小鼠的外周血白细胞、单侧股骨有核细胞、造血干祖细胞计数；缓解辐射引起的小鼠骨髓细胞功能下降；抑制受照小鼠骨髓细胞的凋亡；降低骨髓细胞、造血干祖细胞的活性氧水平；增加血清中GSH和SOD的含量，降低MPO的表达。 总之，本课题研究发现血必净注射液对急性辐射损伤具有一定的治疗作用。课题的顺利完成一方面为血必净注射液临床用于治疗急性放射病提供了实验依据，另一方面也进一步揭示了急性放射病的发病机制。