干扰素诱导蛋白p200家族对小鼠间充质干细胞成脂分化的作用

肥胖是现代人类的健康杀手之一，脂肪细胞数量的增多及体积的增大，均可导致肥胖的发生。除了通过促进脂肪分解及能量消耗来控制肥胖外，阻止脂肪细胞的形成也是预防肥胖行之有效的手段之一。脂肪细胞来源于间充质干细胞 (Mesenchymal stem cells, MSCs),其分化除受到PPARγ、C/EBPs等转录因子的调控外，还受到许多与细胞生长及细胞周期相关蛋白的调控。p200蛋白家族为由干扰素诱导表达的蛋白种类，对成肌、成骨和成软骨等细胞的分化具有重要的调控作用。脂肪细胞与上述三种细胞均来源于间充质，但p200蛋白是否在其分化过程中起作用却鲜见报道。本研究预以小鼠脂肪来源的MSCs为对象，体外进行成脂诱导，检测p200蛋白成员在其分化过程中的表达；选取1～2个表达变化最显著的成员，研究对MSCs成脂分化的作用；再经由免疫荧光、免疫共沉淀等手段阐明其分子机理，并通过动物实验研究其在体内的作用。

p200家族蛋白对许多细胞的生长、凋亡、免疫调节和分化均具有重要的调节作用。其中，p202是一个被广泛研究的家族成员，对家族成员p205的研究相对较少。p202通过与多种转录因子相互作用，并参与调控这些转录因子的活性来调节细胞的周期和分化过程。已有的研究表明，p202参与了成肌细胞、成骨细胞和成软骨细胞的分化过程。脂肪细胞也来源于间充质，但p202或p205蛋白是否在成脂分化过程中起作用却未见报道。伴随着小鼠脂肪来源干细胞 (Mouse adipose-derived stem cells, mASCs)的成脂分化过程，p202的mRNA表达水平和蛋白表达水平均持续增加。前脂肪细胞中，p202主要在细胞核中表达，但在分化的中后期于细胞核和细胞质中均有表达。细胞在转染了p202特异的小干扰RNA后，成脂分化关键因子诸如C/EBPs、PPARγ、LPL、aP2等的转录水平明显降低。对于p202特异siRNA处理的细胞，油红O染色阳性细胞和甘油三酯含量均有所降低。同时，过表达p202蛋白使得成脂分化关键因子的mRNA表达水平升高，且积聚更多的甘油三酯。此外，通过间接免疫荧光和免疫共沉淀检测发现，在分化中后期p202和C/EBPβ、C/EBPα或PPARγ存在相互作用，且p202 RNA干扰可阻碍与p202偶联的C/EBPβ、C/EBPα或PPARγ蛋白量。CHIP检测和荧光素酶活性检测进一步证实p202 干扰可经由C/EBPβ影响C/EBPα和PPARγ的转录活性，并进一步影响后续因子诸如LPL的表达。以上结果表明，p202对于mASCs的成脂分化起到重要的调控作用。对p205的研究结果显示，p205在mASCs成脂分化过程中其表达量是先随时间递增，在第4天后又有下降的趋势；在分化的不同阶段，p205在细胞内的分布也有所变化；p205干扰可抑制mASCs的成脂分化，但过表达该蛋白却对分化无明显影响；共定位研究表明，在分化的中期阶段，p205和C/EBPβ或C/EBC/EBPα存在相互作用；p205干扰可在一定程度上抑制C/EBPβ和C/EBPα的转录活性，进而表明以上两转录因子在p205参与调控mASCs成脂分化中具有介导作用。