滤泡辅助性T细胞在CTLA-4Ig诱导Graves病免疫耐受中的作用及机制研究

Graves' disease (GD) lacks of effective treatment and its pathogenesis is not clear. Our preliminary study has confirmed that cytotoxic T-lymphocyte Antigen 4Ig (CTLA-4Ig) can restore the immune tolerance and lower the expression of T follicular helper (Tfh) in the GD mouse model. It has been found in the literature review that CTLA-4 is the key factor regulating the function of Tfh cells, which are the main ones helping B cells produce antibodies, and the thyrothrophin receptor antibody (TRAb) produced by B cells is the core factor resulting in the onset and relapse of GD. Therefore, we have proposed the hypothesis that CTLA-4Ig may restore the immune tolerance in GD patients through down-regulating the function of Tfh cells, B cell differentiation and TRAb production. In this study, we are going to explore the regulation of CTLA-4 on Tfh cells in vitro using a co-culture system of Tfh and B cells. Simultaneously, the GD mouse model with the BCL-6 gene knockout was used to explore the role Tfh cells play in CTLA-4Ig’s restoring the immune tolerance in vivo. This study will contribute to understanding the mechanism of CTLA-4Ig’s restoring the immune tolerance and the role Tfh cells play in the occurrence of GD, which will in turn provide a theoretical basis and experimental evidence for the latter’s immunological therapy.

Graves病（GD）缺乏有效治疗方式且发病机制不明。前期研究发现，CTLA-4Ig可以在GD小鼠中诱导免疫耐受，同时Tfh细胞相关因子表达下降，提示CTLA-4Ig重建GD免疫耐受中Tfh细胞受到抑制。同时文献表明：CTLA-4是抑制Tfh细胞功能的关键因子，Tfh细胞是辅助B细胞产生自身抗体的最主要细胞，而B细胞产生抗体TRAb是GD发病的核心因素。据此，我们提出假说：CTLA-4Ig通过抑制Tfh细胞功能，降低B细胞分化及TRAb产生来重建GD免疫耐受。本研究中，我们将利用GD病人Tfh与B细胞共培养系统，在体外考察CTLA-4对Tfh的调控作用。同时利用BCL-6基因敲除鼠构建GD模型，体内考察Tfh细胞在CTLA-4Ig重建GD免疫耐受中的作用。本研究的开展将有助于理解CTLA-4Ig重建GD免疫耐受的机制以及Tfh细胞在GD发生中的作用，进而为GD的免疫治疗提供理论基础和实验证据。.

Graves病（GD）缺乏有效治疗方式且发病机制不明。我们的前期研究发现，CTLA-4Ig可以在GD小鼠中诱导免疫耐受，同时Tfh细胞相关因子表达下降，提示CTLA-4Ig重建GD免疫耐受中Tfh细胞受到抑制。本研究中：①我们通过体外实验探讨CTLA-4对GD患者外周血Tfh细胞功能的影响，我们的研究发现Abatacept可有效抑制Tfh细胞增殖、活化以及分泌功能，而Ipilimumab对Tfh细胞增殖、活化以及分泌功能无明显影响，证明CTLA-4可以直接抑制Tfh细胞功能。②我们进一步通过体内试验探讨CTLA-4对Tfh细胞功能的影响。我们的研究结果发现：CTLA-4Ig（Abatacept）体内注射可以引起GD动物模型组小鼠甲状腺组织IL-21、CXCL13表达明显下降，IL-6表达明显升高；脾脏组织IL-21表达明显下降，IL-10和IL-17表达明显上升；胸腺组织IFNγ表达明显下降。我们的研究结果表明CTLA-4在体内也可抑制Tfh细胞功能。③我们进一步探讨，如果体内注射IL-21是否会阻断CTLA-4诱导GD免疫耐受的作用，我们的研究结果发现：IL-21干预组相对于GD治疗组小鼠甲状腺组织IFNg、IFNγ、IL-4、IL-10、IL-21、CXCR5和CXCL13 mRNA水平的表达呈上升趋势，IL-6和IL-17表达呈下降趋势。其中IL-21和CXCL13 表达明显上升，组间差异有统计学意义。IL-21干预组相对于GD治疗组小鼠脾脏组织IL-4、IL-21、CXCR5和CXCL13 mRNA水平的表达呈上升趋势，IFNg、IFNγ、IL-6表达呈下降趋势。其中CXCR5表达明显上升，组间差异有统计学意义。Lenti-IL-21体内注射可以引起GD治疗组小鼠胸腺组织IL-21、IL-6、IL-17、CXCR5和CXCL13 mRNA水平的表达呈上升趋势。其中IL-6、IL-17组间差异有统计学意义。我们的研究结果表明Lenti-IL-21体内注射可以部分阻断CTLA-4Ig的作用，说明TFH参与了GD发病机制，而CTLA-4Ig可以治疗GD在某种程度上与抑制TFH作用有关。