CD4+T淋巴细胞穿孔素基因启动子区域甲基化对自身免疫性肺气肿大鼠肺泡隔细胞凋亡的影响

肺泡隔细胞凋亡参与肺气肿的发病机制愈来愈引起学者们关注。相关资料表明：活化的CD4+T淋巴细胞所引起的自身免疫反应可能是参与肺泡隔细胞凋亡甚至肺气肿形成的新的机制；其他研究还进一步证实：T细胞基因的活性与其DNA甲基化程度相关，如该细胞穿孔素基因启动子区域低甲基化状态可使其基因活性增强，甚至诱发自身免疫性疾病的产生；但是是否和肺泡隔细胞凋亡以及自身免疫性肺气肿相关，尚无文献报道。我们通过建立大鼠自身免疫性肺气肿模型并和正常对照组比较，了解二者CD4+T淋巴细胞上述部位甲基化程度及基因表达水平是否存在差异；通过体外人工甲基化处理模型组及外源性DNA甲基化抑制剂体外干预正常对照组CD4+T淋巴细胞等，旨在进一步明确CD4+T淋巴细胞穿孔素基因启动子区域DNA甲基化对自身免疫性肺气肿大鼠肺泡隔细胞凋亡的影响，为研究该类疾病的发病机制及寻求新的临床治疗途径提供新的理论依据。

一、摘要.背景及方向.　　　近年来，随着凋亡学说兴起，肺泡间隔的结构细胞，包括肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞参与肺气肿的发病机制愈来愈引起学者们关注。但是单纯从经典的三大学说来说明肺泡隔细胞凋亡以及肺气肿的形成是不够全面的。相关资料表明：在一定条件下CD4+T淋巴细胞所引起的自身免疫反应可参与肺泡隔细胞凋亡甚至诱发肺气肿形成。本实验通过研究CD4+T淋巴细胞穿孔素基因启动子区域甲基化对自身免疫性肺气肿大鼠肺泡隔细胞凋亡的影响，以期为完善肺气肿的发病机制及寻求一可能的治疗途径奠定基础。.2、主要内容.　（1） 研究自身免疫性肺气肿模型CD4+T淋巴细胞穿孔素基因启动子区域DNA甲基化水平对其基因mRNA表达的影响。.　（2）研究自身免疫性肺气肿模型CD4+T淋巴细胞穿孔素基因启动子区域DNA甲基化和肺泡隔细胞凋亡的相关性。.　（3）明确CD4+T淋巴细胞穿孔素基因启动子区域DNA低甲基化在自身免疫性肺气肿发病中的重要意义。.　.3、重要结果及关键数据.（1）大鼠腹腔内注射人脐静脉内皮细胞即可建立肺气肿模型。.（2）将自身免疫性肺气肿大鼠脾脏CD4+T淋巴细胞直接注射到正常大鼠腹腔内亦可建议肺气肿模型，且CD4+T淋巴细胞穿孔素基因表达增强。.（3）人工体外甲基化（S-酰胺甲硫氨酸）处理自身免疫性肺气肿大鼠脾脏CD4+T淋巴细胞，之后注射到正常大鼠腹腔不能建立肺气肿模型，且CD4+T淋巴细胞穿孔素基因表达未增强，但其甲基化程度增强。.（4）甲基化抑制剂（5-氮胞苷）处理正常大鼠的脾脏CD4+T淋巴细胞也可导致肺气肿形成，且CD4+T淋巴细胞穿孔素基因表达增强，甲基化程度降低