肝细胞间质变：肝纤维化病变中新机制及其阻断措施的研究

经典认为，肝星状细胞是肝纤维化时肝脏中成纤维细胞的主要来源，由其所产生的胶原等细胞外基质的过度沉积，是肝纤维化发生发展的主要机制，而在肝脏中占绝对多数的肝细胞，在其中的病理生理作用却一直被认为是微不足道的。然而，近有研究表明，上皮细胞间质变(EMT）在肾、肺等组织纤维化中具有重要意义，且TGF-beta1在引发这些组织发生EMT的过程中起着至关重要的作用。而TGF-beta1正是目前已知最强烈的肝纤维化促进因子之一，由其所致的病理生理作用贯穿于肝纤维化的全程。结合预实验的结果，申请者认为在肝纤维化过程中很可能也发生着EMT，并且肝细胞的间质变可能是纤维化时肝脏中成纤维细胞的重要来源。深入了解其病理意义，不仅可以让我们从新的视角去审视肝纤维化发生过程中新的病理生理机制：肝细胞从原来损伤的"受害者"转变为肝纤维化形成的"帮凶"，而且也使得我们在寻找肝纤维化治疗的新靶点方面拓开了一片视野。

已有研究表明，上皮细胞间质变(EMT）在肾、肺等组织纤维化中具有重要意义，且TGF-beta1在引发这些组织发生EMT的过程中起着至关重要的作用。而TGF-beta1正是目前已知最强烈的肝纤维化促进因子之一，由其所致的病理生理作用贯穿于肝纤维化的全程。在此过程中，作为上皮细胞的肝细胞也发生了EMT？其机制和意义如何？这些正是本项目研究的目的。. 通过体外的研究发现，原代小鼠肝细胞于3ng/ml TGF-beta1（在不同的上皮系统中诱导EMT的最适宜刺激量中）孵育48h，E-cadherin表达逐渐减少，白蛋白阳性细胞全部表达FSP1。TGF- beta1孵育96h后，白蛋白染色消失，细胞全部呈梭形、且FSP1阳性，典型EMT来源的成纤维细胞。细胞暴露于TGF- beta1获得FSP1表达。这些发现提示TGF- beta1孵育48h后出现中间型细胞（肝细胞和成纤维细胞标记均为阳性），而96h后发生较完全的EMT。而原代肝细胞经TGF- beta1诱导发生EMT之后，其移行能力明显增强，获得类似成纤维细胞的功能。. 运用CCl4注射法诱导小鼠肝纤维化活体模型，随着肝纤维化的发生、发展，有一部分肝细胞转变成成纤维细胞，肝脏中成纤维细胞的数量也逐渐增多。在晚期肝纤维化中（CCl4注射6周后），17%的细胞为FSP1阳性，其中有28%同时为白蛋白阳性，表明其为肝细胞来源。BMP-7可阻断 TGF- beta1 诱导的 EMT，肝细胞表型标志：E-cad，Albumin mRNA 及蛋白表达明显增高；肝脏间质细胞表型标志：alpha-SMA，FSP-1，N-cad，VM，Collagen I，FN mRNA 及蛋白表达明显减低。维持肝细胞正常表型，增强肝细胞功能。BMP-7 可调节小鼠的肝细胞内 Snail 通路中 Snail1，Snail2，Smad3，Wnt 蛋白表达，可能通过抑制 TGF-β1/ Smads 通路，直接或间接抑制 Snail 通路，进而抑制 EMT。. 结论：肝纤维化有一部分肝细胞发生EMT，肝细胞的间质变可能是纤维化时肝脏中成纤维细胞的重要来源，促进了肝纤维化的发展；BMP-7可阻断 TGF- beta1 诱导的 EMT，抑制肝纤维化的形成和发展。