sDI融合蛋白通过诱导抗原特异性调节性B细胞抑制食物过敏的作用及其机理的研究

The incidence of food allergy(FA) increased rapidly worldwide. The treatment of FA is unsatisfactory. It’s necessary to develop safe and efficient immunotherapy for FA. The T cell epitopes of allergen can induce immune tolerance without cross-linking with IgE receptorto activate mast cells. Targeting on DEC205 can induce immune tolerance. Thus, we screened a dominant T cell epitope of OVA (ovalbumin) [IC(IKHIATNAVLFFGRC)]，synthesized a fusion gene of scFv DEC and IC，and prepared a recombinant protein scFv DEC-IC(sDI). The preliminary study showed that sDI could induce Breg in mice. We hypothesize that sDI may inhibit FA by inducing the antigen specific Breg. The proposed study includes to screen effective T cell epitopes and prepare a fusion protein, the induction of antigen specific regulatory B cells by targeting DEC205, to explore its mechanism of antigen specific Breg induction, and inhibition of FA. The expected results will demonstrate the mechanism by which the sDI induce antigen specific Breg and provide a novel and more effective therapeutic remedy for FA.

食物过敏（FA）的发病率在全球范围内迅速增加，目前尚无有效疗法，亟需安全有效的免疫治疗。过敏原T细胞表位用于免疫治疗不产生IgE交联导致的肥大细胞活化；anti-DEC-抗原/抗原表位（可特异性结合DC）可诱导免疫耐受。因此我们筛选了OVA的T细胞抗原表位IC (IKHIATNAVLFFGRC)，与scFv DEC形成融合基因，制备了融合蛋白scFv DEC-IC（sDI）。初步结果表明sDI可诱导小鼠产生Breg（调节性B细胞），且能够预防性抑制FA。故提出假设sDI可通过诱导抗原特异性Breg（specific Breg, sBreg）而抑制FA。本项目内容包括遴选有效T细胞抗原表位并制备scFv DEC-表位融合蛋白，研究sDI对FA的抑制作用以及sDI诱导sBreg的机理。预期结果将阐明sDI诱导sBreg和抑制FA的机理；为FA的免疫治疗提供新思路和一种新的、更有效的方法。

食物过敏（FA）的发病率在全球范围内迅速增加，成为重要的健康问题，对人类健康和社会经济造成很大负面影响。目前尚无有效疗法，亟需安全有效的免疫治疗。传统的过敏原免疫疗法，过敏原B细胞表位可结合特异性IgE 使致敏肥大细胞和嗜碱性粒细胞脱颗粒释放炎症介质，从而促进过敏，甚至发生全身过敏反应。过敏原T细胞表位免疫治疗可避免IgE交联引起的致敏肥大细胞和嗜碱性粒细胞活化脱颗粒。anti DEC205抗原/抗原表位（嵌和抗体）靶向DEC205受体（不加DC刺激剂）可诱导抗原特异性免疫耐受。研究组筛选获得模式化抗原OVA的T细胞表位IC (IKHIATNAVLFFGRC)，与scFv DEC形成融合基因，制备融合蛋白scFv DEC-IC（sDI）。进一步研究发现体内清除调节性B细胞(Breg)更易诱发FA，而sDI体内体外可诱导IL-10+Breg，且嵌和蛋白靶向DEC（不辅助使用刺激剂）仅引起微弱抗体反应，故提出假设sDI可能诱导抗原特异性Breg（sBreg）抑制FA。计划研究内容包括sDI对sBreg的诱导作用，诱导sBreg的机理及对FA的抑制作用。实际研究内容严格按照计划执行。实验结果显示sDI可诱导分泌IL-10+B细胞，Bcl-6并非参与sDI诱导抗原特异性B细胞分化的关键调控分子，Stat6、Btk、Lyn、Syk、ZAP-70等参与抗原特异性B细胞活化的关键信号分子显著下调，同时耐受型受体Ly75（DEC205）、Clec12a表达显著上调，IL-10以及IL-27表达水平显著上调。综合以上结果提示sDI融合蛋白可通过调控B细胞分化诱导抗原特异性免疫耐受，初步阐明sDI诱导抗原特异性B细胞耐受，进而抑制FA的机理，为FA的免疫治疗提供新思路，为开发安全经济有效的表位疫苗提供有力的基础数据。