探讨南蛇藤总萜增强microRNA-126抑制肝癌VEGF及血管生成的作用和机制

血管过度生成是原发性肝癌生长、侵袭和转移的基础。血管内皮生长因子（VEGF）是促血管生成过程最重要的细胞因子之一，可作为肝癌治疗的标靶。前期研究发现南蛇藤总萜可明显抑制小鼠肝癌细胞Hepa1-6中VEGF的表达水平，但其作用机制还不完全清楚。本研究拟从microRNA及分子信号转导水平，结合体内外实验，深入探讨南蛇藤总萜抑制肝癌血管生成的作用及机制。体内研究：建立绿色荧光蛋白（GFP）标记的人肝癌HepG2细胞裸鼠模型，观察南蛇藤总萜对肝癌移植瘤及瘤内血管生成的抑制作用。体外研究：利用分子克隆技术使VEGF蛋白过表达或低表达，阐明南蛇藤总萜抑制HepG2细胞表达VEGF的信号转导通路；同时利用分子克隆技术使miR-126过表达或低表达，研究南蛇藤总萜是否增强miR-126表达，降低VEGF水平，抑制下游信号通路。本研究可揭示南蛇藤总萜抑制肝癌血管生成的机制，为肝癌治疗提供新的思路。

血管过度生成是原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC，以下简称肝癌）生长、侵袭和转移的基础，可为肿瘤细胞提供充足的营养和排出代谢废物。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是目前所知活性最强的促进血管生成的细胞因子，在肝癌细胞中过量表达，处于血管生成相关信号转导通路的核心地位，可作为肝癌治疗的靶标之一。中草药南蛇藤（Celastrus orbiculatus thunb.，卫矛科，南蛇藤属）的应用在我国已有几千年的历史，主要用于抗风湿和其它抗炎治疗。本课题组前期研究显示，南蛇藤总萜（terpenoids extract from Celastrus orbiculatus, COT）具有抗肿瘤的生物学活性，但其作用机制还未完全揭示。本研究首次对COT抗肝癌的机制进行研究，共分为四部分内容。.1. 南蛇藤总萜抑制肝癌血管生成的体外研究.COT可抑制小鼠肝癌Hepa1-6细胞增殖，促进细胞凋亡，下调肝癌细胞表达VEGF，且机制为通过抑制VEGF mRNA的转录进而抑制VEGF蛋白的翻译过程。COT抑制血管内皮细胞形成网络样毛细血管丛，进而抑制肝癌生长和血管生成。.2. 南蛇藤总萜抑制肝癌血管生成的体内研究一定浓度的COT有抑制肿瘤生长的作用，其机制可能与促进肿瘤细胞凋亡及抑制肿瘤血管生成有关。.3. 南蛇藤总萜抑制人肝癌HCCLM6细胞淋巴管生成.COT促进HCCLM6细胞的凋亡，抑制HCCLM6细胞的增殖和迁移。COT降低VEGF-C蛋白的表达水平，其分子机制可能与MAPK和AKT信号转导通路相关。.4. 南蛇藤总萜抑制裸鼠原位肝癌移植瘤及血管生成.COT促进HepG2细胞凋亡和抑制血管生成可能是其抑制肿瘤生长的途径；COT抗肝癌作用的可能机制：抑制HepG2细胞生长，使细胞周期停滞在G0/G1期；促进细胞中ROS的产生，进而激活凋亡因子的释放，通过激活线粒体凋亡路径，使caspase3活化，导致染色体DNA 裂解，最终引起细胞凋亡；COT抑制血管生成因子VEGF的产生，减少肿瘤新生血管的生成，具有抗肿瘤生长和转移的作用。.本研究为COT的深入研究提供了一定的理论和科学实验依据，也为肝癌的治疗带来新的思路。