利用转基因兔研究 urotensin II 过表达影响动脉粥样硬化进程的分子机制

尾加压素Ⅱ（UⅡ）是目前所知最强的缩血管活性肽。大量体外研究显示UⅡ与动脉粥样硬化（AS）的形成和发展有关，但UⅡ参与AS形成和发展的分子机制远未阐明，迫切需要体内实验来研究。本课题组制作过度表达人UⅡ基因的转基因兔，通过饲喂高胆固醇饲料，诱发AS。采用Northern、Western Blot、酶法、连续超速离心沉淀分离等，测定人UⅡ基因在转基因家兔组织、血液中表达水平，观察转基因和对照家兔血脂、脂蛋白、载脂蛋白及相关酶水平，电镜观察并计算脂蛋白颗粒大小，分析UⅡ对脂质代谢的影响。比较两组动物主动脉AS斑块面积大小，用免疫组化方法检测病变组织中巨噬细胞、α肌动蛋白、UⅡ等，研究转基因家兔AS组织病变特征，利用转录组学和蛋白质组学技术，在基因和蛋白水平上研究UⅡ影响AS形成和发展的可能分子机制，为揭示AS病因、预防和治疗该病提供理论依据。

尾加压素II是一类与心血管疾病相关的血管活性肽，为了研究其与动脉粥样硬化的关系，本研究首先利用显微注射技术建立了尾加压素 II转基因家兔。以转基因家兔和其同窝非转基因家兔为研究对象，给以0.3%胆固醇高脂饲料16周诱导动脉粥样硬化。和对照相比，血脂检测发现尾加压素II高表达并未对血浆胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇等造成明显影响。但尾加压素 II高表达对血压有一定影响，也增加了心脏重量，但并未对其他脏器有明显影响。分离主动脉，分析动脉斑块发现转基因组斑块面积稍大，但无统计学差异。进一步研究发现尾加压素 II增加了斑块内巨噬细胞来源的泡沫细胞比例，改变了斑块性质。虽然平滑肌细胞阳性染色面积也有升高，但两组相比，统计学差异不显著。我们又用体外培养的人脐带内皮细胞进行转录组学研究，用尾加压素II处理人脐带静脉内皮细胞，发现尾加压素 II处理影响了Jak 和MAPK 等信号通路一些分子表达。总之，尾加压素II可影响动脉粥样硬化的发生发展，主要是对斑块细胞组成成分有影响，同时也有刺激心肌细胞增殖的作用。