定量蛋白质组技术筛选原发性肝癌预警标志物的新方法研究

本研究以生物质谱技术为基础结合同位素氨基酸标签（Amino Acid-Coded Tagging，AACT）的蛋白质组定量新技术，建立细胞分泌蛋白质组研究方法。通过对原发性肝癌细胞系QGY-7703和对照组人肝细胞系QSG-7701的分泌性蛋白质进行系统研究，建立肝癌细胞分泌蛋白质数据库，并给出准确的蛋白质相对定量结果。本研究运用多项蛋白质组新技术的优势，从蛋白质组学水平定量研究细胞分泌蛋白质的方法，避免了生物学研究针对单一或某类蛋白质进行研究的方法局限性。.同时运用该方法研究肝癌细胞分泌蛋白质表达谱和肝癌发生相关的差异蛋白谱，确认并筛选出差异蛋白质，为阐明肝癌癌变过程中关键蛋白质的分泌途径，对于揭示肿瘤发生的分子机理提供分子基础；而且从分泌蛋白质中找到的差异蛋白，通过进一步组织和血液样本的生物学验证寻找潜在的肝癌预警标志物，对疾病的早期诊断、治疗和药物开发都具有重要的指导意义。

研究分泌蛋白以寻找生物标志物或药物靶标，这是分泌蛋白质组研究最多的一个方面。本研究以运用氨基酸同位素标记（SILAC/AACT）蛋白质组定量技术结合生物质谱技术（LC-MS/MS），分析了一组人肝细胞系：QGY-7703（原发性肝癌细胞）和QSG-7701（正常人肝细胞）的分泌蛋白进行系统研究。建立了细胞分泌蛋白质组研究方法，优化了收集分析方法；经过生物信息学软件SignalP4.0和 SecrotomeP2.0做进一步筛选，获得1790种蛋白质，其中913种蛋白质被预测为分泌蛋白质，占鉴定蛋白质的51%。其中有834种蛋白质有相对含量的信息。在1790种鉴定的蛋白中，21%的蛋白定位在胞外。本课题根据定量蛋白质组的数据的统计学分析的筛选出了kallikrein-related peptidase 6，lipocalin 2，matrix metallopeptidase 7等，15个在肝癌细胞分泌液中高表答的分泌蛋白质作为肝癌候选生物标志分子。进一步的验证工作还在进行中。