血小板-白细胞聚集体在缺血后适应减少心肌无复流中的作用研究

Myocardial no-reflow (NR) is a severe complication of coronary intervention in patients with acute myocardial infarction (AMI) and is associated with the major adverse cardiac events (MACE). It has been reported that inflammatory-thrombosis mechanism plays an important role in the occurrence of NR. Elevated level of PLA (Platelet-leukocyte aggregates, PLA) was proved to be a new sensitive marker of inflammation reaction and thrombosis formation. Ischemia Postcontioning (IPostC) can extenuate ischemia-reperfusion injury and reduce NR. However, the mechanisms of IPostC reducing NR, to our knowledge, have not been reported. Our study observe the dynamic expression of PLA in the occurrence of NR in patients with AMI, and explore the effects of PLA on clinic prognosis, and meantime, build the in vivo animal model of myocardial NR, observe the effects of IPostC on MAPK inflammatory signal pathway and on expression of PLA. We try to confirm that IPostC can reduce the occurrence of NR in patients with AMI by inhibiting PLA expression, through activating MAPK inflammatory signal pathway. It will rich the theory of NR and wide the therapeutic methods of myocardial NR.

心肌无复流（No-reflow, NR）是急性心肌梗死患者冠脉介入治疗后的严重并发症，与主要不良心脏事件密切相关。炎症-血栓机制是心肌NR发生的重要机制，高表达的血小板-白细胞聚集体（Platelet-leukocyte aggregates, PLA）是体内炎症反应和血栓形成的敏感指标。目前关于PLA在心肌NR发生中的作用尚未见报道。缺血后适应（Ischemia Postcontioning, IPostC）能够减轻缺血再灌注损伤，减少NR的发生，但IPostC减少NR的机制尚不清楚。本课题以急性心肌梗死患者为研究对象，观察PLA在NR中的动态表达及对其临床预后的影响，构建心肌NR模型，观察IPostC对MAPK相关炎症信号通路的影响及其与PLA表达的关系。本课题试图证实IPostC通过激活MAPK相关炎症信号通路抑制PLA而减少NR的发生，既丰富NR理论又为防治NR提供新思路。

心肌无复流（MNR）是经皮冠脉介入治疗（PCI）后的严重并发症。缺血后适应（PostC）是防治MNR的重要措施。在临床试验方面，本项目共纳入行急诊PCI的ST段抬高型心肌梗死（STEMI）患者，应用流式细胞仪检测血小板-白细胞聚集（PLA）水平。共计23%的STEMI患者发生MNR。多因素回归分析表明血小板-中性粒细胞聚集体（PNA）（OR＝1.179，95％CI：1.035-1.342，P=0.013）和血小板-单核细胞聚集体（PNA）（OR＝1.248，95％CI：1.040-1.498，P＝0.017）是MNR发生的独立预测因素。ROC表明PNA（AUC=0.881，95％CI：0.809-0.952，P＜0.001）和PMA（AUC=0.794，95％CI：0.699-0.889，P<0.001）对MNR的发生具有重要的预测价值，是急诊PCI术后MNR发生的独立预测因子。在基础实验方面，本项目将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、缺血后适应组、SB203580组、SP600125组、Anisomycin+缺血后适应（Ani+缺血后适应）组和Ani组。建立大鼠心肌缺血再灌注模型，在不同时间点检测PLA表达水平，测定磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶 ( P-p38 MAPK)和c-Jun氨基末端激酶（P-JNK）表达水平。与I/R组相比，缺血后适应组、SP600125组和SB203580组的CK-MB和TnI水平、梗死面积和再灌注60 min和3 h时PLA表达水平明显降低（P<0.05）。与缺血后适应组相比，Ani+缺血后适应组和Ani组以上指标水平明显升高（P<0.05），Ani组和I/R组之间没有差异（P>0.05）。与I/R组相比，缺血后适应组、SB203580组、SP600125组和Ani+缺血后适应组明显抑制磷酸化p38 MAPK和P-JNK的表达（P<0.05），Ani组的磷酸化p38 MAPK和JNK水平明显升高（P<0.05）。与缺血后适应组相比，Ani+缺血后适应组和Ani组P-p38MAPK和P-JNK表达水平明显升高（P<0.05）。SB203580组和SP600125组具有与缺血后适应组类似的心脏保护作用。本项目证实PostC通过抑制p38 MAPK和JNK的磷酸化而减少再灌注过程中PLA的表达，从而减轻缺血再灌注损伤，减少MNR发生。