当归芍药散活血利水不同配伍对大鼠局灶脑缺血损伤后血管新生神经再生的调控及机制研究

Danggui Shaoyao San (DSS) is a famous herbal formulary from the <Synopsis of The Golden Chamber >, which alleviates female abdominal pain. However, the formula is now increasingly used for cerebral ischemic diseases and shows multiple neuroprotective effects, which is considered to be closely related to its ‘blood activating’ and ‘body fluid transportation and transformation’ actions. Our previous study indicated that DSS improved neurological functional recovery in the subacute stage in ischemic stroke rats by enhancing angiogenesis and neurogenesis. Further study showed that the combination of DSS ingredients that has a ‘blood activating’ action can promote neural stem cell migration. Based on these preliminary results, we hypothesize that the different combinations of DSS ingredients can influence angiogenesis and neurogenesis after cerebral ischemic injury through ‘blood activating’ and/or ‘body fluid transportation and transformation’ actions. Our aims are to: 1) Determine the effects of the different combinations of DSS ingredients on the regulation of angiogenesis and neurogenesis; 2) Analyze the underlying molecular pathways contributing to those effects. We will use molecular biology techniques, animal imaging, immunohistochemistry, and pharmacological tools to study the aims. We expect that this study will not only deepen our fundamental knowledge of DSS, but also contribute to the optimization of the different combinations of DSS ingredients for clinical application.

《金匮要略》当归芍药散主治妇人腹痛，近年来较多用于脑缺血性疾病，具有多重神经保护作用，这和其活血利水的功用密切相关；前期研究表明本方能促进缺血性中风亚急性期的神经功能恢复，促进血管新生、神经再生，而其偏重活血的配伍增加了神经干细胞的迁移，我们提出假说：当归芍药散活血、利水的不同配伍对脑缺血损伤血管新生和神经再生具有不同的贡献度。本项目拟运用分子生物学、动物影像学、免疫组织化学、药理学等技术手段，1)深入研究当归芍药散活血、利水不同配伍对脑缺血损伤的神经保护及血管新生、神经再生的贡献度；2）探讨当归芍药散活血、利水不同配伍对血管新生及神经再生调控因子的影响规律及活血、利水不同配伍各自作用的分子靶点。以期从微观层次上解读中药复方的效应机制，丰富中医活血利水法在脑血管病治疗的内涵，并为当归芍药散在临床的优化配伍及缺血性脑血管病的治疗提供理论及实验依据。

《金匮要略》当归芍药散主治妇人腹痛，近年来较多用于脑缺血性疾病，具有多重神经保护作用，这和其活血利水的功用密切相关；前期研究表明本方能促进缺血性中风亚急性期的神经功能恢复，促进血管新生、神经再生，而其偏重活血的配伍增加了神经干细胞的迁移。本项目拟探讨当归芍药散活血、利水的不同配伍对脑缺血损伤血管新生和神经再生的贡献度，并探讨其保护机制。结果：1、通过小鼠在体局灶性脑缺血模型，探讨当归芍药散活血、利水不同配伍对小鼠脑缺血损伤的保护作用。研究结果显示，活血倍量组对脑损伤面积、神经功能具有更加显著的保护作用。2、探讨当归芍药散不同配伍比例对神经再生、血管新生的影响规律。研究结果显示活血倍组大鼠对血管新生的贡献度最大，相反利水2的配伍对血管新生没有任何贡献。同样，活血倍量组对神经再生的贡献度最大。3、探讨当归芍药散对神经血管新生相关因子的影响规律。采用蛋白芯片技术我们筛选了54个与血管新生相关因子，研究结果显示，与对照组比较，原方组中FGF-2、SDF-1、VEGF的表达显著升高，具有统计学差异。活血倍量组的FGF-2、SDF-1、VEGF与原方组比较进一步显著升高。与神经再生相关因子BDNF的表达，在活血倍量组显著升高。4、探讨当归芍药散不同配伍调节神经再生及血管新生的信号转导机制。原方给药3天与对照组比较显著增加了P-Plcr1、 P-FAK、P-Akt、eNOS、VEGFR2、Notch1的表达，活血倍组显著增加了P-Akt、P-Src、 eNOS、VEGFR2、Notch1的表达的表达。采用Notch1 shRNA抑制Notch1的表达，当归芍药散促进血管新生的作用减弱，说明当归芍药散促进血管新生可能通过Notch1信号通路发挥作用。.在完成目标任务的同时，我们探讨了当归芍药散对缺血性脑卒中后小胶质细胞极化的影响。此外探讨了当归有效成分Ligustilide对血管新生的影响。.共发表论文12篇，其中SCI论文10篇，核心期刊论文2篇。发表会议论文2篇。已经接受待发表论文2篇。获得国家实用新型专利1项，申请国家发明专利1项。项目直接和间接培养研究生7人。目前有2篇中文文章，2篇SCI论文在撰写中。