A20和Pyrin重组蛋白对小鼠哮喘模型气道炎症的抑制作用及机制的研究

糖皮质激素是目前治疗哮喘最有效的抗炎药物，但激素除抗炎作用外还有很多副作用,严重影响患者的健康。因此发现能选择性抑制气道炎症而副作用小的治疗技术是临床亟需解决的问题。研究认为NF-kB是调控众多炎症因子基因表达的调节因子,与哮喘气道炎症的形成、持续存在及进展密切相关。A20和Pyrin是具有抑制NF-kB激活的重要蛋白。我们的前期实验表明把碱性氨基酸多肽序列插入到A20和Pyrin蛋白内能大大提高这些蛋白的细胞内导入效率，能有效地调节细胞内信息传递，而且在小鼠腹腔巨噬细胞中，这些重组蛋白能抑制由 LPS 诱导的组胺合成。因此，本研究通过建立小鼠支气管哮喘气道炎症模型，探讨上述A20和Pyrin重组蛋白对哮喘小鼠气道炎症的选择性抑制作用, 在分子水平上进一步研究其具体的作用机制，为研制更有效的新的哮喘治疗技术提供理论依据。

结题摘要（1000字）. 为阐明A20和Pyrin重组蛋白对支气管哮喘气道炎症和气道重构的抑制作用，项目组圆满完成了5项计划研究内容，并进行了拓展研究。1.我们曾发现把碱性氨基酸多肽序列插入到A20 和 Pyrin目的蛋白内能大大提高这些目的蛋白分子的细胞内导入效率。本研究利用此技术，用大肠杆菌成功制备A20 和 Pyrin重组蛋白；2.用卵清白蛋白(OVA) 为抗原建立哮喘模型；3.用不同的浓度,在不同的时期用点鼻的方法，巧妙的气道局部给（哮喘模型小白鼠）A20 和 Pyrin重组蛋白；4.用HE染色，Masson三色染色观察镜下肺组织病理改变；用图像分析软件测定支气管壁厚度（WAt/Pbm）、支气管平滑肌厚度（WAm/Pbm）及胶原纤维面积；用ELISA检测支气管肺泡灌洗液中IL-4、IL-5、TNF-α及IFN-γ含量；用RT-PCR检测肺组织中CTGF和TGF-β1的mRNA表达；用western blote方法检测NF-kB的表达。5.结果发现哮喘模型组小鼠BALF中细胞总数、IL-4、IL-5、TNF-α水平增高和，IFN-γ水平降低；肺组织支气管管壁厚度、气道平滑肌厚度、胶原纤维面积, CTGF、TGF-β1的转录和表达水平以及NF-kB表达水平均显著高于生理盐水对照组组(P<0.05)。 相比之下Pyrin和A20重组蛋白3天和7天干预组小鼠BALF中细胞总数、IL-4、IL-5、TNF-α水平和肺组织支气管管壁厚度、气道平滑肌厚度、胶原纤维面积、NF-kB表达水平显著降低，与哮喘模型组比较均具有显著差异(P<0.05)，而 BALF中 IFN-γ水平明显上升，与哮喘模型组比较，均具有显著差异(P<0.05)；Pyrin 重组蛋白7天干预组CTGF、TGF-β1的转录和表达水平显著低于哮喘组(P<0.05)。根据以上我们推测Pyrin和A20重组蛋白可能部分是通过抑制NF-kB信号途径来调节IL-4、IL-5、TNF-α，IFN-γ水的水平，阻断TGF-β1和CTGF的过度表达而实现抑制气道炎症，进而抑制气道重构的发生。本研究为以后研制更有效的新的哮喘治疗技术提供理论依据。在本课题的资助下我们还发现Pyrin和A20重组蛋白可调控肺组织中MMP-9/2和HO-1表达、提高抗氧化酶活性，而对肺纤维化起保护作用。