小青龙汤对哮喘小鼠气道炎症启动因子TSLP的调控作用及靶向细胞DCs的影响

It is an effective and classic method to treat asthma with Xiaoqinglongtang. We have finished animal experiments of Xiaoqinglongtang from the view point of molecular biology and pathology,and found that Xiaoqinglongtang could effectively alleviate airway remodeling and reduce the deposition of inflammation factors in asthmatic mice. Generally, a number of inflammation factors are involved in the development of asthma, and the initiation factor thymic stromal lymphopoietin (TSLP) plays an essential role. The expression of TSLP is influenced by proinflammatory cytokine, such as IL-1βand TNF-α. Then, through the regulation of NF-κB, it binds to a receptor on the surface of the cell to induce inflammation. Consequently, the DCs are activated and the CD4+T cell precursors change into Th2, resulting in the generation of more TSLP.This signal pathway could explain the main pathogenesis of asthma. So we plan to find out the impacts of Th2 in vitro experiments. Thus, we can find the therapeutic target of Xiaoqinglongtang for asthma. In addition, this research can be used to further explain the mechanism of Xiaoqinglongtang in warming lungs, reducing phlegm and treating asthma.

小青龙汤治疗哮喘经典而有效，本课题组曾对小青龙汤加减方做相关分子生物学、病理学方面的动物实验研究，发现其能有效地减轻哮喘小鼠气道重塑及炎症因子的沉积。但参与哮喘发病的炎症因子甚多，而气道炎症启动因子胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）在哮喘发病过程中起到关键作用，而TSLP的表达受到IL-1β和 TNF-α等促炎细胞因子影响，经NF-κB调控与细胞表面受体相结合从而发挥炎症效应，以激活DCs，激发CD4+T 细胞前体向Th2转化，诱发更多的TSLP产生,这一信号环路可能解释哮喘发病的重要机制。本课题拟通过小青龙汤对哮喘小鼠气道炎症启动因子TSLP信息传导环路（TNF-α-NF-κB-TSLP-Th2-TNF- α）的干预研究，并对靶向细胞DCs表面Th2表达的影响进行体外实验，以发现小青龙汤对哮喘的治疗靶点，进一步阐释小青龙汤温肺化饮治疗哮喘的作用机制。

胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）信息传导环路（TNF-α-NF-κB-TSLP-Th2-TNF-α）是哮喘发病的重要机制，本课题通过体内、体外实验，运用分子生物学、细胞生物学、病理学等技术，对小青龙汤干预TSLP信息传导环路（TNF-α-NF-κB-TSLP-Th2-TNF-α）进行了初步研究。首先我们参照已报道的相关造模方法，在中医寒哮证“痰伏于肺为发病宿根，外感风寒为诱导因素”的发病机制的指导下，建立了寒性哮喘发作期小鼠模型。进而通过实验研究发现，寒性哮喘小鼠发作期血清中IL-1β、TNF-α及血清、肺组织中TSLP、NF-κB表达均增高，糖皮质激素、小青龙汤均可降低寒性哮喘发作期小鼠血清中IL-1β、TNF-α及血清、肺组织中TSLP、NF-κB表达水平，从而抑制TSLP信息传导环路（TNF-α-NF-κB-TSLP-Th2-TNF-α），减轻气道炎症浸润，缓解哮喘症状。然后我们从TSLP-OX40L-TNF-α信号传导通路角度探讨小青龙汤的作用机制，结果表明小青龙汤可降低寒性哮喘小鼠血清中TNF-α、肺组织中TSLP及OX40L的表达，降低肺组织中炎症细胞的浸润，缓解气道狭窄，产生和OX40L单克隆抗体类似的作用，那么小青龙汤也可能参与TSLP-OX40L-TNF-α信号传导通路中，以阻断OX40L为作用靶点来治疗寒性哮喘。同时我们进行了小青龙汤含药血清体外抑制TSLP对树突状细胞活化的研究，发现小青龙汤能通过降低CD40、CD80、CD86、TNF-α，抑制树突状细胞活化。综上所述，本研究探讨了小青龙汤治疗哮喘的作用机制，通过抑制TSLP信息传导环路（TNF-α-NF-κB-TSLP-Th2-TNF-α）实现，可成为寻找支气管哮喘新治疗靶点的有力依据，也为小青龙汤治疗哮喘的有效性提供了科学依据，促进了中医药的现代化发展。同时，在此研究基础上，我们成功申报了2018年国自然面上项目（基于“鼻-肺-肠”共有黏膜免疫系统探索加味小青龙汤对哮喘大鼠淋巴细胞归巢过程及结局的影响，81873338），拟对中医药干预黏膜免疫方面治疗哮喘进行深入研究。