糖尿病肾病TLR4与RAS系统对话关系及TLR4基因沉默对肾病起始和进展影响的研究

糖尿病肾病（Diabetic nephropathy, DN）是导致终末期肾脏病的重要病因之一，其发病机制尚不完全清楚。研究已发现，肾小球系膜细胞/肾小管上皮细胞中存在天然免疫受体TLR4（Toll like receptor 4），其信号异常与肾硬化存在密切关系。本项目旨在通过DN模型、肾系膜细胞/小管上皮细胞培养和人体肾组织研究，探讨TLR4在DN发生和进展中的作用，阐明DN是一种炎症性疾病的主要机制；并应用SiRNA转染、Realtime PCR等技术探讨高糖环境下肾素血管紧张素系统（RAS）对TLR4的转激活效应，明确RAS 系统与TLR4信号在氧化应激、炎症和纤维化等方面的对话关系，从而初步阐明天然免疫系统和血管紧张素系统与糖尿病肾病三者之间的内在联系。为创造性地研究糖尿病肾病的发生机制及临床糖尿病肾病的防治提供新的理论依据和新的干预靶点。

首先构建大鼠糖尿病肾病（Diabetic nephropathy，DN）模型，观察toll样受体4（toll-like receptor 4，TLR4）及炎性因子在DN模型中的表达变化，并通过siRNA（RNAi）干扰技术选择性下调TLR4基因的表达，探讨糖尿病肾病大鼠肾组织炎性因子表达的变化，阐明TLR4在糖尿病肾病发生发展中可能的作用。证实DN通过上调TLR4表达，进而上调炎性因子表达，刺激肾脏基底膜增生引起肾小球、肾小管为主的肾脏病变，厄贝沙坦可通过下调TLR4的表达，对DN起到保护作用。接着通过siRNA干扰技术选择性下调TLR4基因的表达，探讨高糖环境对大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）TLR4及其转接子髓分化因子88（MyD88）和炎性因子的影响。证实高糖上调小管上皮细胞TLR4/MyD88信号及炎性细胞因子表达，血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)可增强此效应；特异性基因沉默可以阻断由高糖及AngⅡ诱导的TLR4信号通路的激活，并下调炎症介质的释放；TLR4信号通路在高糖高肾素环境肾小管上皮细胞炎性反应机制中发挥关键作用。紧接着观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞TLR4信号通路与炎症因子的表达情况，论证AngⅡ对高糖环境下肾小球系膜细胞天然免疫炎性反应的正向调节关系。结果证实高糖和高肾素导致大鼠肾小球系膜细胞炎性因子表达增加均与TLR4/MyD88信号通路的激活相关，TLR4信号通路在糖尿病系膜细胞天然免疫炎性反应机制中发挥关键效应。AngⅡ对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞炎性因子释放起正向调节作用。最后探讨TLR4信号在DN患者的表达及使用ARB干预对TLR4信号通路的影响。研究对象为2012年7月至2013年7月南昌大学第一附属医院肾内科住院的DN患者，使用ARB治疗的为ARB组，未使用ARB治疗的患者为DN组，泌外科行肾脏切除的肾组织为对照组。证实DN患者肾组织TLR4信号上调，使用ARB可减弱TLR4信号，减轻DN炎性反应及肾功能损害，提示阻断TLR4信号通路可能是治疗DN的新策略。