TLR4及其内源性配体在糖尿病肾病中的作用及机制研究

1型糖尿病所引起的糖尿病肾病已经成为年轻人终末期肾病的主要病因。已有的研究表明在肾脏进行性纤维化过程中，增生的细胞外基质暴露出TLR4的各种内源性配体均可激活TLR4，从而引发一系列免疫反应，导致肾脏的损伤。申请者前期工作中发现细胞免疫和体液免疫共同参与了1型糖尿病小鼠糖尿病肾病的进展，并且发现TLR4基因敲除的糖尿病小鼠肾脏中的免疫反应明显减轻。TLR4与其内源性配体在糖尿病肾病的发生发展中起到了怎样的作用？TLR4基因敲除后对糖尿病肾病起病及进展会有怎样的影响？尚无研究报道。本研究拟在前期研究的基础上，进一步从TLR4及其各种内源性配体的表达、TLR4信号通路下游蛋白以及多种炎性细胞因子的改变、TLR4的组织来源及功能研究来阐述TLR4及其内源性配体在1型糖尿病引起的糖尿病肾病中的作用及机制。本研究将进一步认识糖尿病肾病的发生机制，可能为疾病的治疗提供新的靶点。

完成糖尿病肾病模型的建立，通过注射链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病模型。随机选取8只作为正常对照组（N组），其余20只注射链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病模型，并随机分为糖尿病组（DM组）、霉酚酸酯组（M组）。12周后测量大鼠血糖、体质量、肾质量/体质量、24h尿蛋白定量、血肌酐，观察肾小管间质病理形态学变化，应用免疫组化技术和Western Blot检测肾组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及转化生长因子β1 (TGF -β1)的表达。结果发现DM组血糖、肾质量/体质量、24h尿蛋白定量、血肌酐、肾小管-间质损伤指数（TII）均明显高于N组（P<0.01），M组除血糖、体质量外（P＞0.05），其余指标均明显低于DM组（P<0.01）；免疫组化结果显示，DM组肾小管上皮细胞胞浆中α-SMA、TGF -β1表达均明显高于N组（P<0.01），M组明显低于DM组（P<0.01）；Western Blot结果显示，DM组肾组织α-SMA、TGF-β1表达较N组分别增加3.4倍与1.1倍，M组肾组织α-SMA、TGF-β1表达较DM组分别下降55%与40%。结论MMF能显著下调糖尿病大鼠肾小管上皮细胞α-SMA、TGF-β1的表达，抑制肾小管上皮细胞转分化，起到肾脏保护作用。.. 在动物实验基础上，开展了相关临床研究。收集了240例糖尿病肾病（不同时期）患者和60例正常对照组的基本临床资料、相关生化指标，测定了患者和正常对照组血清中维生素D水平，发现随着糖尿病肾病的逐渐进展，患者血清维生素D水平逐渐下降，并具有统计学意义。亚组分析显示在糖尿病肾病5期患者中透析患者比非透析患者的血清维生素D水平更低。