中枢活性氧介导尾加压素II心血管效应的机制研究

尾加压素Ⅱ的外周心血管效应可因种属及解剖的差异而表现明显不同，而UⅡ的中枢心血管效应却相当一致而稳定。尾加压素Ⅱ（UII）可能通过激活交感系统来影响心血管功能，但UⅡ的中枢机制尚知之甚少。近年研究显示中枢活性氧可引起交感兴奋，在已证实UII可促进中枢活性氧产生的前期工作基础上，本课题提出活性氧可能中介了中枢UII的心血管效应，设想通过降低中枢活性氧水平以阻断其对UII的介导作用，降低交感神经兴奋效应，从而阻断中枢UII的升压作用。通过整体实验明确中枢活性氧在介导UII心血管效应中的作用，分析活性氧介导UII激活交感的中枢作用途径。在此基础上通过神经细胞培养和脑片膜片钳技术研究活性氧参与UII调节神经元活动的机制。本课题的意义在于从整体和细胞水平两方面对中枢活性氧中介UII心血管效应的机制作较深入的探讨，对于探索治疗高血压的新途径具有潜在的应用价值。

UII可能通过激活交感神经系统影响心血管功能，但至今对于UII的中枢调节机制仍知之甚少。本课题提出活性氧（ROS）可能中介中枢UII的心血管效应的假设。 首先，采用免疫组化观察自发性高血压大鼠（SHR）和正常血压大鼠（WKY）延髓UII受体（UT）的表达，发现在大鼠延髓头端腹外侧部（RVLM）和孤束核均有UT表达。其次，动物整体实验研究：在SHR和WKY大鼠侧脑室及RVLM微量注射均发现：UII可引起血压升高，且在SHR大鼠更明显；预先注射Urantide（UT抑制剂），发现Urantide可阻断UII的升压效应，提示中枢UII在SHR和WKY大鼠的效应的差异可能与两种动物延髓中UT密度的不同相关，且RVLM是UII产生中枢心血管效应的重要核团，其他脑区微量注射UII产生的效应可能在RVLM进行整合。RVLM区注射Tempol（SOD类似物）或Apocynin（NADPH酶抑制剂），UII的升压效应均可被阻断，提示UII在RVLM区的升压效应可能是由ROS介导的。第三，酶标法测定大鼠RVLM区NADPH氧化酶的活性，发现SHR大鼠的RVLM区NADPH氧化酶的活性比WKY大鼠的高，提示ROS介导了中枢UII的心血管效应。第四，免疫荧光结合激光共聚焦研究发现：NADPH氧化酶胞膜亚单位gp91phox和p47phox与UT在RVLM区的神经元上均有共表达；Real-Time PCR和Western blot发现: UII可增加SHR大鼠RVLM区NADPH氧化酶亚单位gp91phox、P47phox mRNA及蛋白的表达水平，提示中枢UII可能作用于RVLM的UT，促使胞浆亚单位p47phox磷酸化，与胞膜亚单位gp91等形成有活性的氧化酶，催化超氧阴离子的生成。另外，近年来H2S作为调节血压的研究热点，我们进一步的研究发现：H2S抑制UII的升压效应可能是通过抑制RVLM区NADPH氧化酶抑制ROS的生成而导致的。综上所述，本课题研究发现UII在SHR大鼠的中枢心血管效应通过以下途径介导：UII作用于RVLM的UII受体UT，激活NADPH氧化酶，引起超氧阴离子等活性氧水平增加，继而介导交感兴奋的心血管效应。本课题的研究结果对于探索治疗高血压的新途径可能具有潜在的应用价值。