miRNA-10b在肝癌侵袭和转移中的作用机制研究

肝癌侵袭转移迅速是肝癌病死率高的主要原因。RhoC、MMPs、VEGF、uPA-PAR等转移相关基因在肝癌转移中发挥重要作用。miR-10b是一种促转移miRNA，调控了乳腺癌等肿瘤的侵袭转移，但在肝癌中的功能尚不明确。通过回顾文献及预实验，我们推测miR-10b可能直接或间接调控RhoC、MMPs等转移相关基因影响肝癌侵袭转移。本项目拟通过分析临床肝癌样本确定miR-10b与转移相关基因以及临床病理资料的相关性，明确miR-10b评价肝癌预后的可行性，通过过表达/敲减miR-10b观察体内对肝癌迁移侵袭的调控，进行靶向miR-10b抗肝癌转移实验性治疗，探索miR-10b新的靶基因。深入阐明miR-10b调控肝癌侵袭转移过程，有助于我们进一步认识肝癌转移的分子机制，为寻找肝癌治疗新靶点、探索更有效的肝癌治疗方法奠定理论基础。

肝细胞肝癌侵袭转移十分迅速是其死亡率高的主要原因。本项研究发现miR-10b在肝癌组织中表达上调，与HOX10D负相关，与RhoC、MMP2、MMP9、uPA、VEGF等基因正相关，结合临床资料分析，miR-10b表达上调与肝癌侵袭转移密切相关，生存分析提示miR-10b表达与肝癌患者生存期负相关，是肝癌的不良预后因素。构建miR-10b过表达和敲减的肝癌细胞系，通过MTT增殖实验、划痕修复实验、体外Transwell迁移和侵袭实验，我们发现miR-10b可以在体外促进肝癌细胞的增殖、体外迁移和侵袭能力，是一种促肿瘤侵袭microRNA。在肝癌细胞中敲减miR-10b后细胞迁移能力下降，而过表达miR-10b后细胞的迁移力提高。通过建立肝癌裸鼠皮下移植瘤模型，发现过表达miR-10b后，肿瘤增殖显著增快，提示miR-10b对肝癌体内增殖有显著的促进作用。通过荧光素酶报告基因，我们证实在肝癌中HOXD10是miR-10b的直接靶基因，miR-10b可以直接结合HOXD10的mRNA 3'UTR区，在肝癌细胞中下调miR-10b后HOXD10蛋白表达显著上调，RhoC、uPAR、MMP-2、MMP-9等HOXD10下游基因均出现表达上调，提示miR-10b可能通过HOXD10/RhoC/ uPAR/ MMPs的信号通路促进肝癌的侵袭和转移。于此同时我们还鉴定了miR-10b促进肝癌侵袭转移的新靶基因KLF11，初步探索发现miR-10b可能通过靶向KLF11参与了TGF-β调控的肝癌细胞间质上皮转化过程，丰富了miR-10b参与肝癌侵袭转移的新机制。目前课题已基本完成，已取得以下成果：以共同第一作者、通讯作者分别在J Transl Med、Med Oncol杂志发表SCI论文2篇，另已修回SCI论文2篇待发表，其中1篇影响因子>5。本项目培养硕士研究生2名，均在读，以上成果已基本完成申请书预期研究目标。