microRNA调控胰腺癌干细胞自我更新对胰腺癌化疗敏感性的意义和机制研究

Recent study had reported that pancreatic cancer is a stem cell disease and CD24+CD44+ESA+ cell population is pancreatic cancer stem cell. The percentage of CD24+CD44+ESA+ cell population is 0.2%-0.8% in total pancreatic cancer cells. It has the very strong tumorigenic ability. These population of cells has potential capacity of self-renew and resist to chemoradiotherapy. MicroRNAs participate in regulation ofthe stem cell self-renew and differentiation in recent study.We have reported that microRNA regulated proliferation and metastasis of pancreatic cancer and paused cell cycle at G0/G1 status previously. Pancreatic cancer cells colonyforming ability was enhanced and CD24+CD44+ESA+ cell population increased significantly after treatmented with gemcitabine. Regarded these as foundation, We would like to preparating by screening microRNA in pancreatic cancer cell that associated with self-renew and confirm the signal conduct pathway of these microRNAs in this task , and then to investigate the mechnism that pancreatic cancer stem cell was insensitive to around circumstance. The aim of our stusy is to inhibitor pancreatic cancer stem cell self-renew by block or activate the microRNA result in sensitivity to chemotherapy in pancreatic cancer and establish new treatment stagery of pancreatic cancer base on microRNA.

目前认为胰腺癌是一种干细胞疾病，被认为是胰腺癌干细胞的CD24+CD44+ESA+细胞群占胰腺癌细胞的0.2%-0.8%，其致瘤能力强大，具有自我更新和分化潜能，对化、放疗抵抗。近期研究报道microRNA对肿瘤干细胞的自我更新和分化起重要调节作用。我们的前期研究证实了microRNA参与了调控胰腺癌的增殖和转移，使胰腺癌细胞周期阻滞在G0/G1期，预实验结果显示，吉西他滨治疗后增强了胰腺癌细胞形成克隆的能力，增加了CD24+CD44+ESA+细胞群的富集。以此为基础，本课题拟结合临床样本分析和实验模型，筛选参与调节胰腺癌干细胞自我更新相关的microRNAs，研究其调控的网络途径，探讨胰腺癌干细胞对化疗不敏感的分子机制，通过一定的手段激活或阻断其信号传导通路，抑制胰腺癌干细胞的自我更新，增强其对化疗药物的敏感性，为以microRNA为分子靶标的新型胰腺癌治疗方案奠定理论基础。

胰腺癌是一种高度恶性的消化道肿瘤，预后较差，目前化疗仍是胰腺癌辅助治疗的重要手段之一。但临床缓解率和远期疗效仍不够理想，化疗耐药是其主要原因之一。因此，研究胰癌细胞对吉西他滨耐药，探索新的有效治疗方法目前显得尤为迫切。在本项目研究中，我们以人胰腺癌组织标本库为基础，以寻找胰腺癌治疗新靶点为目标，研究小RNA分子对胰腺癌的生成、增殖、凋亡和对化疗药物敏感性的调控作用及机制，旨在减少广大胰腺癌患者的痛苦，提高生活质量，延长生存期奠定基础。在本研究中，我们从分子水平检测miR-17-5p的表达情况及其序列有利于肿瘤的早期诊断和治疗，对判断预后也有一定的意义。明确miR-17-5p对胰腺癌细胞恶性行为的影响及其机制，为胰腺癌进行基因治疗和克服化疗耐药探索新的治疗方法奠定理论基础。同时在本课题理论指导下有望发现相应的肿瘤早期诊断分子、胰腺癌预后预测分子、胰腺癌化疗耐药分子和胰腺癌分子靶向治疗分子。. Wnt/β-catenin信号通路已被报道在肿瘤干细胞干性维持中起着重要的作用（CSCS），此信号传导通路在胰腺癌中通常是被高度激活，这与胰腺癌的发生密切相关。因此，探索Wnt/β- catenin信号调控机制可能为胰腺癌的治疗提供有意义的临床靶点。在本项目研究中，我们证实了上调胰腺癌miR-744能激活Wnt/β-catenin信号传导通路，其作用机制miR-744直接作用于Wnt /β-catenin的三个重要的负调节因子：β分泌型卷曲相关蛋白1（SFRP1），糖原合成酶激酶3β（GSK3β），和转导状增强剂分裂3（TLE3）。miR-744在胰腺癌患者肿瘤组织中表达明显上调，且预示着胰腺癌病人预后不良。此外，我们还通过体内外实验验证了过表达胰腺癌细胞miR-744和抑制miR-744时，胰腺癌干性细胞的表型变化。重要的是，在人源性胰腺移植动物模型表明，miR-744上调增强胰腺癌细胞的致瘤性。这些研究结果表明，miR-744在促进胰腺癌干细胞的细胞表型中起着至关重要的作用，并可能代表一种新的预后标志物和治疗靶。