大疱性类天疱疮抗原在痴呆及脑卒中诱发大疱性类天疱疮中的作用机制研究

大疱性类天疱疮 (BP) 是一种获得性自身免疫性皮肤病，流行病学资料表明痴呆及脑卒中发生BP的风险更高。研究发现BP抗原1和2（BPAG1和BPAG2）在神经组织中也存在，我们通过免疫印迹首次发现BP合并痴呆及脑卒中患者的血清能识别鼠大脑及人大脑中的BPAG1及BPAG2。本课题将通过免疫印迹及ELISA方法检测痴呆及脑卒中患者脑脊液中抗BPAG1抗体及抗BPAG2抗体的存在水平，并通过基因工程技术、免疫印迹、免疫组化及免疫荧光等方法，探索抗BPAG1神经亚型抗体注入新生小鼠皮下能否与皮肤组织中抗原结合及诱发BP的情况，并以被动转移试验来验证痴呆及脑卒中患者脑脊液及血清能否诱发小鼠BP，由此揭示BPAG1、BPAG2作为共同抗原在痴呆及脑卒中诱发BP中的作用机制，并以BPAG1、BPAG2作为靶点为防治BP及痴呆、脑卒中提供新策略。

大疱性类天疱疮 (BP) 是一种好发于老年人的获得性自身免疫性皮肤病，痴呆及脑卒中发生BP的风险更高。研究发现BP抗原（BPAG1和BPAG2）同时存在于皮肤组织与神经组织，前期研究我们已发现BP合并痴呆及脑卒中患者的血清能识别鼠大脑及人大脑中的BPAG1及BPAG2。本课题通过免疫印迹及ELISA方法发现少数痴呆及脑卒中患者脑脊液及血清中能检测到抗BPAG1抗体及抗BPAG2抗体。通过杂交瘤技术制备抗小鼠BPAG1单克隆抗体，能同时与小鼠皮肤与脑组织反应。通过免疫印迹发现抗BPAG2两个不同表位的抗体包括抗BPAG2 NC16A抗体（来自BP患者血清）与抗BPAG2 NC1-NC3抗体，均能同时与人源化BPAG2 NC16A小鼠（BPAG2 NC16A+/+）的皮肤与脑组织反应。通过RT-PCR进一步证实BPAG2 mRNA同时存在于鼠脑及皮肤。对人源化BPAG2 NC16A小鼠脑组织各部位蛋白进行免疫印迹检测，发现BPAG2在鼠脑多个部位均有表达，不同部位的表达量有差异，含量最高的部位为大脑皮质、海马及小脑。采取两步法分别提取细胞浆和细胞膜蛋白进行免疫印迹检测,表明BPAG2在脑组织中位于细胞膜及细胞浆。激光共聚焦技术进一步证实了BPAG2在脑组织中位于细胞膜及细胞浆，而且发现BPAG2同时表达于神经元及神经胶质细胞。通过免疫印迹及免疫沉淀技术均证实小鼠脑组织中BPAG2分子量约为160kd，而不同于皮肤中的180kd，为明确分子量差异的原因，设计了覆盖鼠BPAG2 mRNA全长的12对引物，通过RT-PCR对小鼠皮肤及鼠脑进行检测，发现BPAG2 mRNA在鼠脑缺失551位碱基，由此首次证实BPAG2在脑组织可能为新的亚型。本研究提供了证据表明痴呆及脑卒中患者可能通过BPAG1、BPAG2共同抗原的作用进而诱发BP，也为进一步的动物实验研究奠定了基础。